重組大腸桿菌DH5α生產(chǎn)rNGR-Tum-5工藝的研究.pdf

1、本文包括五個章節(jié)。從發(fā)酵培養(yǎng)基，搖瓶培養(yǎng)條件，5L發(fā)酵罐培養(yǎng)條件三個方面對重組大腸桿菌DH5α生產(chǎn)rNGR—Tum-5的能力進行研究。使得在高密度培養(yǎng)情況下工程菌細胞終濃度OD600達到16.0，rNGR—Tum-5表達量達到30％，rNGR—Tum-5的生產(chǎn)能力達到4.80。 1．重組大腸桿菌DH5α發(fā)酵培養(yǎng)基的篩選 在搖瓶中對大腸桿菌DH5α的發(fā)酵培養(yǎng)基進行研究，首先從幾種常用的培養(yǎng)基中篩選出LB培養(yǎng)基作為基礎(chǔ)培養(yǎng)基

2、。在此基礎(chǔ)上，對培養(yǎng)基中的碳源、氮源、微量元素進行篩選，得出在培養(yǎng)基組分(％)為：甘油1，酵母粉3，蛋白胨1，氯化鈉0.5，微量元素母液0.15時，重組大腸桿菌DH5α生產(chǎn)rNGR—Tum-5的能力最強，較初始培養(yǎng)基提高了3倍。 2．重組大腸桿菌DH5α搖瓶發(fā)酵的篩選 在搖瓶中，研究發(fā)酵工藝條件如溫度、溶氧量、種子菌齡、誘導(dǎo)時機、誘導(dǎo)劑濃度、誘導(dǎo)表達時間等對工程菌生長情況和蛋白表達的影響。得出最佳培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)溫度37

3、℃，搖床轉(zhuǎn)速200rpm，種子菌齡選擇在OD600為1.0，在對數(shù)生長中期(OD600=2.0，4h處)時誘導(dǎo)，誘導(dǎo)劑濃度選擇在0.5mmol/L，誘導(dǎo)表達時間為4h。 3．重組大腸桿菌DH5α在5L發(fā)酵罐中的培養(yǎng) 根據(jù)工程菌高密度發(fā)酵的生長曲線，確定誘導(dǎo)時機。優(yōu)選出合適的接種量8％，得出發(fā)酵罐中工程菌生長和蛋白表達情況?？刂苝H時采用二階段培養(yǎng)法，前期菌體生長和后期蛋白表達維持在不同的pH范圍，使工程菌生產(chǎn)rNGR—T