乳酸細(xì)菌濃集條件的研究.pdf

1、乳酸菌作為益生菌中頗具代表的菌群,其產(chǎn)品中乳酸菌的數(shù)量是衡量該類產(chǎn)品質(zhì)量?jī)?yōu)劣的重要指標(biāo)之一。如何獲得含大量乳酸細(xì)菌的菌懸液以制備高菌濃、高活性的乳酸菌產(chǎn)品已成為目前研究的重點(diǎn)與難點(diǎn)。目前常用的濃集乳酸細(xì)菌的方法是高密度培養(yǎng)法或分離法,但這兩種方法存在操作復(fù)雜,需要借助昂貴的儀器設(shè)備等問(wèn)題,限制了這兩種方法在工業(yè)化生產(chǎn)乳酸菌時(shí)的推廣應(yīng)用。本課題借助包埋的方法使乳酸細(xì)菌濃集在海藻酸鈣凝膠載體中,定向釋放后可獲得高密度的乳酸細(xì)菌懸液,此方法簡(jiǎn)

2、便,對(duì)設(shè)備的要求低,可為乳酸細(xì)菌的工業(yè)化生產(chǎn)提供理論依據(jù)。
　　 本課題以德氏乳桿菌保加利亞亞種(Lactobacillus delbrueckii subsp.Bulgaricus)為研究對(duì)象,為了獲得高密度的乳酸細(xì)菌懸液,采用固定化中的包埋法,選用瓊脂、海藻酸鈉兩種載體,先將德氏乳桿菌保加利亞亞種(Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus)固定,再培養(yǎng)相應(yīng)的凝膠載體。培養(yǎng)過(guò)程中,菌

3、體集中在凝膠載體的網(wǎng)格內(nèi)生長(zhǎng)繁殖,培養(yǎng)結(jié)束后,取出培養(yǎng)基中的載體,將載體中的菌體釋放得到高密度的乳酸細(xì)菌懸液。試驗(yàn)的結(jié)果如下:
　　 1)L.B.菌體培養(yǎng)基的優(yōu)選:在純牛乳培養(yǎng)基、稀釋乳培養(yǎng)基、MRS培養(yǎng)基、中藥藥液培養(yǎng)基中培養(yǎng)德氏乳桿菌保加利亞亞種,發(fā)現(xiàn)德氏乳桿菌保加利亞亞種在純牛乳培養(yǎng)基和MRS培養(yǎng)基中生長(zhǎng)最好。
　　 2)采用瓊脂包埋乳酸菌對(duì)乳酸菌濃集效果的影響:采取瓊脂作為包埋介質(zhì)時(shí),可采用切割法包埋乳酸菌,得到

4、載體大小為3mm3的載體,將之置于MRS培養(yǎng)基和牛奶培養(yǎng)基中培養(yǎng),所得載體中菌數(shù)分別為4.2×108cfu/g、4.8×108cfu/g。但瓊脂載體中的菌體不能在生理鹽水或飽和NaCl溶液中釋放,綜合考慮不采取瓊脂作為包埋乳酸菌的載體。
　　 3)采用海藻酸鈉包埋乳酸菌對(duì)乳酸菌濃集效果的影響:采用MRS菌液作為包埋菌液時(shí),海藻酸鈉包埋乳酸菌的最佳條件為MRS菌液與2％海藻酸鈉溶液以1:1的比例混合后,滴入0.1M CaCl2溶液

5、中固化0.5～1h。
　　 包埋載體的最佳培養(yǎng)條件為將載體置于含1％CaCO3的牛奶培養(yǎng)基中,于37℃、120r/min培養(yǎng),培養(yǎng)16h時(shí)載體中菌數(shù)達(dá)到最大值,為2.5×1011cfu/g。
　　 采用稀釋乳中的L.B.菌液、稀釋酸乳中的L.B.菌液、中藥藥液中的L.B.菌液作為包埋菌液制成載體后,培養(yǎng)所得載體,載體中的最大菌數(shù)分別為6.8×109cfu/g、7.6×109cfu/g、9.5×108cfu/g。
　

6、　 4)載體中菌體的釋放:載體與2％檸檬酸鈉溶液以1:1的比例混合后,將混合物置于40℃保溫1h,載體中的菌體可完全釋放,且得到的菌懸液可與50％的復(fù)原乳均勻混合;將此菌懸液以1％、10％的比例接入滅菌牛乳后,于39℃培養(yǎng),凝乳時(shí)間分別為12h、10h,說(shuō)明釋放后的菌體仍具有活性。
　　 5)擴(kuò)大化試驗(yàn):用采用保定蘭格恒流泵有限公司生產(chǎn)的BT100-1J型恒流泵進(jìn)行造粒的擴(kuò)大試驗(yàn),發(fā)現(xiàn)用恒流泵造出的載體形態(tài)圓整。采用不同的轉(zhuǎn)速