膠原蛋白分子構(gòu)象穩(wěn)定性研究.pdf

1、三價(jià)鉻離子(Cr(Ⅲ))與膠原配位主要發(fā)生在天門(mén)氨酸和谷氨酸側(cè)鏈離子化羧基位置。本文從分子水平上深入系統(tǒng)的探討了Cr(Ⅲ)/膠原相互作用的交聯(lián)過(guò)程，以及影響交聯(lián)過(guò)程的諸多因素。以上研究對(duì)于蛋白質(zhì)與金屬離子交聯(lián)過(guò)程的本質(zhì)認(rèn)識(shí)有著重要的理論和實(shí)際意義。 膠原蛋白的分子量分布、羧基含量、等電點(diǎn)和溫度是影響Cr(Ⅲ)/膠原性能和應(yīng)用的幾個(gè)重要參數(shù)，采用SDS-PAGE測(cè)定了10種不同膠原蛋白的分子量分布，得出實(shí)驗(yàn)用酸溶膠原和堿溶膠原的α

2、、β組分分布集中；采用DSC測(cè)定了堿溶膠原和酸溶膠原蛋白分子發(fā)生構(gòu)象轉(zhuǎn)變的臨界溫度；采用粘度法測(cè)定了堿溶膠原蛋白的等電點(diǎn)，研究了中性電解質(zhì)在減弱pH對(duì)粘度影響中的作用；采用電導(dǎo)滴定法測(cè)出了膠原羧基的含量。 在極低濃度下，對(duì)膠原蛋白大分子構(gòu)象的濃度依賴(lài)性規(guī)律研究表明，粘度法與動(dòng)態(tài)光散射法的結(jié)果具有很好的一致性，確認(rèn)了動(dòng)態(tài)接觸濃度(cs)的存在。采用粘度法研究了pH值、NaCl濃度和溫度對(duì)cs的影響：在堿溶膠原等電點(diǎn)兩邊，隨pH值增

3、加，cs先減小后增加；隨溫度和NaCl濃度增加，cs增加。 影響Cr(Ⅲ)/膠原交聯(lián)過(guò)程的因素很多：Cr(Ⅲ)濃度、膠原濃度、pH值、NaCl濃度、反應(yīng)溫度等，采用粘度法、動(dòng)態(tài)光散射法對(duì)其進(jìn)行研究。研究結(jié)果表明：當(dāng)固定膠原濃度為0.211g/L(羧基含量1.32μM)，Cr(Ⅲ)濃度滿足[Cr(Ⅲ)]/[COOH]摩爾比值低于7.1，Cr(Ⅲ)/膠原體系主要以分子內(nèi)交聯(lián)為主；Cr(Ⅲ)濃度滿足[Cr(Ⅲ)]/[COOH]摩爾比值

4、大于7.1，體系主要以分子間交聯(lián)為主；當(dāng)[Cr(Ⅲ)]/[COOH]摩爾比值增大到126.5時(shí)，形成的交聯(lián)體系不穩(wěn)定。當(dāng)固定Cr(Ⅲ)濃度為57.4μM，膠原濃度滿足[Cr(Ⅲ)]/[COOH]摩爾比值高于84.4，形成的體系不穩(wěn)定；膠原濃度滿足[Cr(Ⅲ)]/[COOH]摩爾比值小于57.4，形成的Cr(Ⅲ)/膠原體系以分子間交聯(lián)為主；隨著[Cr(Ⅲ)]/[COOH]摩爾比值的進(jìn)一步減小，發(fā)生分子內(nèi)交聯(lián)的速度減慢，當(dāng)膠原濃度介于兩者之