NADH及脫氫酶型電化學(xué)生物傳感器的制備方法研究.pdf

1、脫氫酶型電化學(xué)生物傳感器是在輔酶的參與下，利用修飾在電極表面的脫氫酶檢測(cè)目標(biāo)分子的一種電化學(xué)裝置。脫氫酶反應(yīng)在維持生命正常運(yùn)轉(zhuǎn)、細(xì)胞新陳代謝等方面具有重要意義。將傳感器的快速、便攜和低成本的特性與脫氫酶反應(yīng)的高特異性相結(jié)合，制備脫氫酶型電化學(xué)生物傳感器用于檢測(cè)疾病相關(guān)的目標(biāo)分子，對(duì)于滿足臨床對(duì)疾病快速診斷的需求具有重要價(jià)值。本論文圍繞目前脫氫酶型電化學(xué)生物傳感器研究中存在的關(guān)鍵問(wèn)題開展了相關(guān)的研究。具體內(nèi)容分為以下兩部分:
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2、1)構(gòu)建了基于MDB/GMC/CS納米復(fù)合物，采用一步滴涂法制備電化學(xué)傳感器，用于NADH的高靈敏、高特異檢測(cè)。利用GMC對(duì)MDB的強(qiáng)吸附特性，將MDB固載于GMC表面;利用CS的多聚陽(yáng)離子特性和良好的成膜性，將MDB/GMC復(fù)合物分散后滴涂于電極表面，制備MDB/GMC/CS納米復(fù)合膜;考察了修飾電極對(duì)NADH的電催化特性;在電活性分子（抗壞血酸、尿酸、多巴胺等）和金屬離子（鉀離子、鈉離子、鈣離子、鎂離子）存在下，修飾電極對(duì)NADH分

3、析的特異性;在優(yōu)化電位下修飾電極對(duì)NADH表現(xiàn)出高的靈敏度(10.36nA/μM)，快速響應(yīng)(5 s)和低的檢測(cè)限(0.186μM)及長(zhǎng)期穩(wěn)定性。(2)構(gòu)建了MDB/GMC/ADH/NAD+/CS納米生物復(fù)合物，用于一步滴涂法制備乙醇電化學(xué)傳感器。將上述研究制備的MDB/GMC/CS納米復(fù)合物與乙醇脫氫酶(ADH)和氧化型輔酶(NAD+)共混后，一步滴涂法修飾于電極表面，制備無(wú)試劑的一次性乙醇電化學(xué)生物傳感器;利用CS良好的成膜性和生物

4、形容性，將ADH穩(wěn)定地固定于電極表面;考察了傳感器對(duì)乙醇的電化學(xué)響應(yīng);在優(yōu)化了修飾酶濃度和電化學(xué)檢測(cè)條件后，乙醇傳感器表現(xiàn)出高的靈敏度(67.28 nA/mM)、寬的線性范圍(0.5-15 mM)、低的檢測(cè)限（80μM）、良好的穩(wěn)定性（40天）和重現(xiàn)性（批內(nèi)、批間差異RSD＜5％）;分析了電子介體MDB在不同的酸堿環(huán)境下的穩(wěn)定性;利用制備好的一次性乙醇傳感器分析了全血標(biāo)本，回收率在97.2％到106％，表現(xiàn)出良好的分析精度。