微波輔助合成用于開管毛細(xì)管電色譜柱的制備及應(yīng)用性能的研究.pdf

1、開管毛細(xì)管電色譜作為毛細(xì)管電色譜的重要分支，結(jié)合了毛細(xì)管區(qū)帶電泳的高柱效和高效液相色譜高選擇性的優(yōu)點(diǎn)，成為當(dāng)今分析化學(xué)領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。大量的末端官能團(tuán)、緊密且精確控制的分子結(jié)構(gòu)是樹狀大分子所具有的獨(dú)特性質(zhì)，PAMAM是通過支化基元逐步重復(fù)的反應(yīng)得到的具有樹枝狀高度支化結(jié)構(gòu)的大分子，將其引入到毛細(xì)管電色譜柱中可以大大增加柱的表面積、容量和選擇性，提升柱的性能。微波加熱作為一種不同于傳統(tǒng)加熱模式，具有內(nèi)外同熱、熱應(yīng)力小、效率高、加熱速度快的

2、特點(diǎn)。本文將開管毛細(xì)管電色譜柱的制備技術(shù)，PAMAM樹枝狀大分子和微波輔助合成方法相結(jié)合，開展以下研究工作。
　　 采用微波輔助合成方法快速地制備了PAMAM樹枝狀大分子為固定相的開管毛細(xì)管電色譜柱。在微波加熱的條件下，通過丙烯酸甲酯與KH550的端氨基發(fā)生Micheal加成反應(yīng)，得到半代的PAMAM，之后端酯基與乙二胺發(fā)生酰胺化反應(yīng)，得到一代的枝形大分子PAMAM，重復(fù)以上，制得二代、三代樹枝狀大分子修飾的毛細(xì)管開管電色譜柱。

3、首次嘗試用FITC熒光標(biāo)記的方法對制得的PAMAM修飾的開管毛細(xì)管電色譜柱進(jìn)行表征，結(jié)果表明微波輔助合成方法用于制備PAMAM樹枝狀大分子修飾毛細(xì)管柱是可行的。與常規(guī)方法相比，微波輔助合成方法大大地縮短了PAMAM/OTCEC柱的制備周期。獲得的3G PAMAM/OTCEC柱對丙氨酸和輔氨酸達(dá)到了基線分離。用丙酮考察獲得PAMAM/OTCEC柱，遷移時(shí)間的RSD＜3.0％，說明制備的毛細(xì)管柱具有良好的重現(xiàn)性。用丙氨酸和輔氨酸對3 GPA

4、MAM/OTCEC柱的穩(wěn)定性進(jìn)行測試，10天后峰面積RSD＜6.0％，說明制得的開管毛細(xì)管色譜柱的具有良好的穩(wěn)定性。
　　 利用微波輔助合成方法制備β-環(huán)糊精衍生物(Br-β-CD)為固定相的開管毛細(xì)管電色譜柱。通過FITC熒光標(biāo)記的方法優(yōu)化KH550修飾毛細(xì)管柱的微波反應(yīng)時(shí)間，在微波功率140 W，微波溫度40℃的條件下，微波反應(yīng)10 min，KH550修飾毛細(xì)管柱的熒光強(qiáng)度最大。繼續(xù)通入Br-β-CD，微波反應(yīng)30 min，

5、制得Br-β-CD/OTCEC柱。獲得的毛細(xì)管柱對N-乙酰-DL-蛋氨酸、1-苯基-1，2-乙二醇達(dá)到基線分離。用丙酮和1-苯基-1，2-乙二醇考察制得毛細(xì)管柱的性能，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，制得的Br-β-CD/OTCEC柱具有良好的穩(wěn)定性和重現(xiàn)性。
　　 毛細(xì)管酶微反應(yīng)器是從固定化酶術(shù)發(fā)展而來的，將酶固定在毛細(xì)管內(nèi)，可以進(jìn)一步減少酶的消耗量。本文以氨基?；笧槟Ｐ停晒Φ刂苽?G PAMAM樹枝分子修飾的毛細(xì)管柱酶微反應(yīng)器。通過高分支

6、PAMAM樹枝狀大分子的引入，可以大大增加表面固定酶的容量，并且減小固定化的酶分子在剛性基體表面出現(xiàn)構(gòu)像變化的可能性，保持酶的活性。利用毛細(xì)管區(qū)帶電泳(CZE)優(yōu)化制備的酶微反應(yīng)器的酶解條件，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，酶解溫度37℃，17.5μg mL-1N-乙酰-DL-蛋氨酸磷酸緩沖溶液(pH7.5，0.02 moL L-1)，底物的流速4μL min-1，制備的毛細(xì)管酶微反應(yīng)器具有良好的酶解效果。在優(yōu)化條件下，考察10天內(nèi)(每天酶解5次)酶解產(chǎn)