發(fā)酵木糖產(chǎn)酒精高溫酵母菌株構(gòu)建的研究.pdf

1、該文主要對(duì)發(fā)酵木糖的酵母工程菌的構(gòu)建進(jìn)行了研究,并對(duì)獲得的理想融合菌株進(jìn)行了發(fā)酵條件的優(yōu)化研究,為纖維素類生物質(zhì)的全面利用打下了菌種方面的基礎(chǔ).通過(guò)對(duì)大量菌株的篩選,得到了高溫釀酒酵母G47.該菌株在45℃能良好生長(zhǎng),并能較好地發(fā)酵葡萄糖,但不能發(fā)酵木糖.當(dāng)?shù)孜餄舛葹?0﹪葡萄糖時(shí),41℃和45℃下發(fā)酵,發(fā)酵液中酒精終濃度為分別為3.9﹪(w/w)和2.0﹪(w/w),轉(zhuǎn)化率分別為75﹪和39﹪.該研究以高溫下發(fā)酵葡萄糖的釀酒酵母G47

2、和木糖發(fā)酵菌株休哈塔假絲酵母1766作為出發(fā)菌株,通過(guò)單倍體誘導(dǎo)生成及分離,得到G47-12(a)和1766-115(α)等9株單倍體菌株.單一營(yíng)養(yǎng)缺陷型為穩(wěn)定可靠的遺傳選擇標(biāo)志,通過(guò)UV和DES誘變對(duì)所挑選出的G47-2(a)和1766-4(a)兩株單倍體進(jìn)行誘變.通過(guò)對(duì)突變株的篩選鑒定得到G47-2Lys<'-1>(a)和1766-4 Ura<'-1>(a)兩突變株,實(shí)驗(yàn)證明兩突變株為正突變株.該研究以G47-2Lys<'-1>(a

3、)和1766-4 Ura<'-1>(a)作為構(gòu)建高溫木糖發(fā)酵菌株的融合親株.通過(guò)聚乙二醇(PEG)和電誘導(dǎo)融合等方法,實(shí)現(xiàn)了發(fā)酵木糖產(chǎn)酒精的休哈塔假絲酵母和高溫釀酒酵母之間的融合.融合子經(jīng)DNA含量、細(xì)胞體積測(cè)定和穩(wěn)定性能試驗(yàn)證明為穩(wěn)定的融合子.融合子F-71能在45℃下發(fā)酵木糖產(chǎn)酒精,其在45℃發(fā)酵木糖所產(chǎn)生的酒精體積百分?jǐn)?shù)為1.67﹪(v/v).與親株相比,F-71的酒精耐受能力也提高了14.3﹪.通過(guò)對(duì)融合子發(fā)酵培養(yǎng)基優(yōu)化以及系列