高效發(fā)酵啤酒酵母菌株的定向快速篩選.pdf

1、啤酒是依賴于純種啤酒酵母，對麥汁某些組分進行一系列的代謝過程，產生酒精等各種風味物質，構成獨特風味的飲料酒。酵母菌株的優(yōu)劣在影響啤酒品質的眾多因素中，占據(jù)著舉足輕重的份量，所以酵母可以稱為啤酒的靈魂。所以選育出優(yōu)良的啤酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）對啤酒生產工藝和質量有決定性意義。
　　傳統(tǒng)啤酒酵母發(fā)酵周期太長，發(fā)酵副產物含量高，嚴重影響啤酒的產量。高效發(fā)酵包括快速發(fā)酵以及優(yōu)質發(fā)酵。啤酒酵母的高效發(fā)酵使

2、整個生產周期縮短，可達到降低生產成本的目的。同時，減少對啤酒品質和風味的影響。本研究通過進行出發(fā)菌株篩選，基因組重排技術選育高效發(fā)酵啤酒酵母菌株，2 L放大實驗、100 L規(guī)模發(fā)酵實驗以及生產應用實驗，制備出了高效發(fā)酵啤酒酵母菌株，并且通過感官品評分析，確定了其口感的可行性。本研究主要涉及的實驗結果及結論如下：
　　1基因組重排親株選育
　?。?）出發(fā)菌株的選擇
　　通過測定啤酒酵母的降糖速度、TVDK含量以及風味物質

3、，選取下面啤酒酵母b（TVDK含量較低）和c（降糖速度較快）作為出發(fā)菌株。
　?。?）抗葡萄糖效應親株選育
　　將啤酒酵母c在添加有0.04％2-脫氧-D-葡萄糖并以麥芽糖為唯一碳源的培養(yǎng)基上進行紫外照射20 s，得到抗葡萄糖效應啤酒酵母菌株9號。
　　（3）D-Val敏感親株選育
　　將啤酒酵母b利用添加500 mg/L D-Val對酵母進行了馴化實驗，得到D-Val敏感啤酒酵母菌株15號。
　　2基因組

4、重排模式的優(yōu)化及應用
　?。?）蝸牛酶濃度為2%，酶解時間為30 min，酶解溫度為28℃作為原生質體制備條件。
　?。?）15 W紫外燈，照射距離為30 cm，照射2 min，60℃下滅活4 min作為雙親滅活條件。
　　（3）聚乙二醇4000濃度選取30%，處理30 min作為原生質體融合條件。
　?。?）通過基因組重排技術初步選育出5株高效發(fā)酵啤酒酵母菌株0-2-2、0-2-16、0-3-4、0-3-9、0

5、-3-16。
　?。?）比較5株基因組重排菌株與出發(fā)菌株的發(fā)酵特性，與供試菌株相比，重排菌株降糖速度提高43.3%左右，TVDK含量降低35%~50%之間。選取3株菌株進行遺傳穩(wěn)定性實驗并最終確定1株最佳高效發(fā)酵啤酒酵母菌株0-2-2。
　　3放大實驗
　　（1）2 L放大實驗
　　高效發(fā)酵啤酒酵母菌株0-2-2平均降糖速度為1.98 oP/d，較FJ11提高了12.50%；TVDK終含量為0.072 mg/L，

6、FJ11較降低了51.35%；乙醛含量為4.10 mg/L,較FJ11降低了4.87%。
　?。?）100 L規(guī)模發(fā)酵實驗
　　高效發(fā)酵啤酒酵母菌株0-2-2的發(fā)酵特性：降糖速度達到2.33°P/d；TVDK含量為163.16μg/L，VDK含量為0.052 mg/L；乙醛含量為7.82 mg/L；酒精度為4.5%vol。經過感官品評得出，0-2-2具有較強麥芽香、甜味和酯香味。
　　（3）生產應用實驗
　　高效