高效發(fā)酵木糖生產(chǎn)乙醇酵母菌株的構(gòu)建.pdf

1、本文從三株木糖發(fā)酵菌出發(fā)，對(duì)發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行優(yōu)化，選取木糖50 g·L-1，蛋白胨3g·L-1，酵母粉3 g·L-1，轉(zhuǎn)速為1 00 r·min-1微好氧環(huán)境進(jìn)行發(fā)酵，通過菌種性能鑒定，選擇了性狀較為優(yōu)良的休哈塔假絲酵母(Candida shehatae)作為木糖發(fā)酵的出發(fā)菌株。 為了改善木糖發(fā)酵酵母的性狀，進(jìn)一步通過乙醇馴化，增強(qiáng)休哈塔假絲酵母的乙醇耐性，進(jìn)而進(jìn)行呼吸缺陷型的篩選，提高休哈塔假絲酵母的木糖發(fā)酵能力。利用改良過的休

2、哈塔假絲酵母做為親本，與發(fā)酵性能優(yōu)良的釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)進(jìn)行屬間原生質(zhì)體融合。采用單親滅活法對(duì)休哈塔假絲酵母原生質(zhì)體進(jìn)行紫外滅活，在聚乙二醇(PEG)誘導(dǎo)下融合。對(duì)得到的融合子進(jìn)行木糖發(fā)酵能力測(cè)定，篩選到了一株木糖發(fā)酵性能比親本得到明顯提高的融合子F-6，此融合子發(fā)酵50 g·L-1木糖，最高乙醇濃度達(dá)到18.75 g·L-1，乙醇得率為0.375，達(dá)到理論轉(zhuǎn)化值的73.4％。與原始出發(fā)菌株相比

3、，乙醇產(chǎn)量提高了28％。在模擬纖維素酸水解液的成分比例的葡萄糖和木糖的混合糖中進(jìn)行發(fā)酵，對(duì)比融合子與親本的總糖和木糖消耗情況，融合子F-6的發(fā)酵速率優(yōu)于親株，發(fā)酵周期比親本株縮短了6 h。為有效利用木質(zhì)纖維素為原料生產(chǎn)燃料乙醇奠定了良好的基礎(chǔ)。本研究結(jié)果表明，在木糖發(fā)酵乙醇的過程中，親本假絲酵母的乙醇耐性和木糖發(fā)酵性能的提高對(duì)后續(xù)獲得乙醇發(fā)酵性能高的融合株是十分必要的。 為了進(jìn)一步采用基因組改組的方法提高休哈塔假絲酵母的木糖發(fā)酵