G蛋白偶聯(lián)受體PKR2內吞及激活ERK1-2的機制研究.pdf

1、PKs(Prokineticins)包括PK1、PK2兩種，兩者在結構上具有高達50％的同源性。它們通過與兩種高度相似的G蛋白偶聯(lián)受體（G-protein coupled receptor，GPCRs）:PKR1和PKR2相結合，參與胃腸道平滑肌收縮、血管生長、疼痛性感受、進食、生物節(jié)律、炎癥反應和情緒調節(jié)等一系列生理過程。PKR2和PK2的突變與卡爾曼綜合征、低促性腺素性功能減退癥有關。我們最近的研究發(fā)現(xiàn)，用PK2刺激表達PKR2的細

2、胞導致PKR2受體快速內吞，并在配體移除后又能重新回到細胞膜上，但是PKR2內吞的具體機制目前還不清楚。用PK2刺激表達PKR2受體的細胞會引起細胞外信號調節(jié)激酶(Extracellular signal regulated kinase1/2，ERK1/2)的瞬時磷酸化，但這一過程的具體作用機制還不清楚。
　　目的:
　　闡明PKR2內吞以及PKR2活化引起ERK1/2磷酸化的分子機制。
　　方法:
　　(1)

3、通過激光共聚焦方法，分析GFP標記的PKR2受體在膜上以及細胞質中的分布比例，來研究PKR2的內吞。過表達顯性負效應的蛋白（如GRK2、β-arrestin），RNA干擾以及化合物等方法影響GRK2、β-arrestin、網(wǎng)格蛋白、蛋白激酶C的功能，檢測上述分子在配體引起的PKR2內吞以及PKR2的異源內吞中的作用;通過WesternBlot檢測ERK1/2的磷酸化。
　　(2)通過加入各種抑制劑，研究受體內吞、蛋白激酶C、表皮生

4、長因子受體、磷脂酶Cβ(PLCβ)以及MEK在PKR2活化導致ERK1/2磷酸化中的作用。
　　結果:
　　(1) PK2誘導的PKR2內吞需要GRK2和網(wǎng)格蛋白的參與，但并不需要β-arrestin蛋白的參與。
　　(2) PKC活化可導致PKR2受體的異源內吞，但是PKC的活化不是PK2誘導的PKR2受體內吞所必須的。
　　(3) PKR2活化引起的ERK1/2磷酸化不需要PKR2內吞、PKC活化以及EGFR