Chemerin受體CMKLR1的內(nèi)吞機(jī)制.pdf

1、G蛋白偶聯(lián)受體的內(nèi)吞在受體從細(xì)胞膜上清除、受體運(yùn)輸和跨膜信號(hào)傳遞中發(fā)揮重要作用。本論文研究chemerin的受體CMKLR1通過(guò)與配體結(jié)合后，怎樣內(nèi)吞及它的內(nèi)吞怎樣影響受體信號(hào)傳導(dǎo)。實(shí)驗(yàn)手段包括：通過(guò)CMKLR1-GFP（綠色熒光蛋白）融合蛋白在細(xì)胞內(nèi)的聚集和在CMKLR1受體表面的減少來(lái)檢測(cè)CMKLR1的內(nèi)吞；采用可以干預(yù)受體內(nèi)吞的試劑檢測(cè)網(wǎng)格蛋白（clathrin）在受體內(nèi)吞中的作用；定點(diǎn)突變潛在的磷酸化位點(diǎn)絲氨酸和蘇氨酸；外源表達(dá)

2、野生型和突變型CMKLR1，闡明內(nèi)吞、鈣流和ERK（細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶）磷酸化之間的關(guān)系。本研究發(fā)現(xiàn)chemerin和chemerin衍生九肽C9引起劑量依賴性CMKLR1內(nèi)吞，CMKLR1在C9作用下內(nèi)吞可達(dá)90％，而突變幾個(gè)推定的G蛋白偶聯(lián)受體激酶（GRK）和蛋白激酶C（PKC）磷酸化位點(diǎn)可減弱CMKLR1的內(nèi)吞。CMKLR1內(nèi)吞減弱的同時(shí)，增強(qiáng)了部分受體突變體介導(dǎo)的鈣流，產(chǎn)生了ERK磷酸化峰值的左移。據(jù)此，本研究認(rèn)為CMKLR1內(nèi)