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1、G蛋白偶聯(lián)受體(G-protein-coupled receptors,GPCRs)家族參與了機(jī)體內(nèi)多種生理過(guò)程的調(diào)節(jié),是治療多種人類(lèi)疾病的主要藥物靶點(diǎn)。檢測(cè)非G蛋白亞基依賴的G蛋白偶聯(lián)受體的內(nèi)吞可用于研究受體激動(dòng)劑的活性。本論文首先從藍(lán)細(xì)菌克隆到新的DnaE內(nèi)含肽并鑒定其自我剪接功能;此后我們建立了一種新型的定量分析GPCRs內(nèi)吞的方法,該方法基于Npu-DnaE內(nèi)含肽介導(dǎo)的蛋白剪接而重組斷裂Renilla熒光素酶活性和被配體活化的受
2、體與β-arrestins2之間的相互作用。試驗(yàn)檢測(cè)了4個(gè)功能差異(即偶聯(lián)不同亞型G蛋白)的G蛋白偶聯(lián)受體:昆蟲(chóng)脂動(dòng)激素受體(AKHR)、人源煙酸受體(HM74a)、人源大麻受體2(CB2)、人源組胺受體1(H1)的內(nèi)吞作用,結(jié)果所得的已知激動(dòng)劑或拮抗劑引起相應(yīng)受體內(nèi)吞的EC50或IC50值與文獻(xiàn)一致,充分證明了該方法的可行性與靈敏性。其方便快速、靈敏定量的特性可進(jìn)一步用于細(xì)胞水平上G蛋白偶聯(lián)受體的功能篩選,為高通量藥物篩選領(lǐng)域注入新的
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