大豆抗原蛋白Glycinin與β-Conglycinin的分離純化與定量檢測方法的建立.pdf

1、大豆glycinin與β-conglycinin分別占大豆蛋白的40％和30％，是最主要的大豆抗營養(yǎng)因子之一，它的存在影響了大豆制品在飼料中的使用。本研究以低溫豆粕為原料，經(jīng)分離純化大豆glycinin與β-conglycinin，制備抗glycinin與抗β-conglycinin多克隆抗體，建立了定量檢測大豆glycinin與β-conglycinin的單向免疫擴散檢測法（Single Radial Immunodiffusion，

2、SRI）。
　　 分離純化蛋白先采用Tris-HCl緩沖液堿提酸沉，硫酸銨分級沉淀進行初步分離，再利用ConA-Sepharose4B親和層析進一步純化。純化蛋白經(jīng)SDS-PAGE凝膠電泳，Quantity One軟件分析可得：大豆glycinin純度>90％，大豆β-conglycinin純度>80％。
　　 利用純化的大豆glycinin與β-conglycinin作為免疫蛋白原，采用腳掌、胭淋巴結(jié)、背部皮下及耳靜脈

3、綜合免疫法分別免疫大耳白兔。雙向免疫擴散測抗血清效價高于1：32時，采血制備血清，硫酸銨鹽析純化，向純化的抗體中添加1％甘氨酸和1％海藻糖，冷凍干燥保存。經(jīng)雙向免疫擴散檢測，兩種抗體間無交叉反應(yīng)，同時，抗體也不與花生粕、棉粕、菜粕、玉米蛋白粉和魚粉等飼用蛋白原料反應(yīng)，表現(xiàn)出較好的特異性。
　　 采用單因素實驗優(yōu)化提取樣品抗原蛋白的方法。以純化的大豆glycinin與β-conglycinin為標準蛋白，建立定量檢測大豆glyci