FcαR內(nèi)吞及脫落機(jī)制研究.pdf

1、本論文分為兩部分，第一部分研究了FeαR（CD89）的內(nèi)吞機(jī)制，第二部分研究了FeαR的脫落機(jī)制。另外，2006年3月至2007年2月期間，本人參與了本課題組尹娜博士的研究課題，這部分研究內(nèi)容和結(jié)果未納入本論文，具體內(nèi)容詳見尹娜博士的博士論文以及發(fā)表文章。
　　 第一部分
　　 FcαR是IgA的Fc受體，在IgA介導(dǎo)的免疫反應(yīng)中發(fā)揮著重要作用。研究發(fā)現(xiàn)，IgA以及IgA免疫復(fù)合物結(jié)合FcαR后，會被FcαR迅速內(nèi)吞入細(xì)

2、胞內(nèi)。但是，F(xiàn)cαR介導(dǎo)IgA和IgA免疫復(fù)合物內(nèi)吞的機(jī)制還不清楚。在本研究中，我們使用天然表達(dá)FcαR的U937細(xì)胞以及轉(zhuǎn)染的CHO、COS-7和Hela細(xì)胞，系統(tǒng)性地研究了FcαR的內(nèi)吞機(jī)制。通過使用能特異性抑制不同內(nèi)吞途徑的化學(xué)抑制劑、過表達(dá)Eps15負(fù)顯性突變體以及運(yùn)用RNA干擾技術(shù)抑制內(nèi)源性籠型蛋白重鏈（CHC）的表達(dá)水平，我們證明了FcαR是通過籠型蛋白途徑內(nèi)吞的。內(nèi)吞后FcαR進(jìn)入Rab5以及Rab11陽性的內(nèi)體中。但是，

3、過表達(dá)Rab5的負(fù)顯性突變體并不能抑制FcαR的內(nèi)吞。同時，通過過表達(dá)Dynamin的負(fù)顯性突變體，我們發(fā)現(xiàn)FcαR內(nèi)吞依賴于Dynamin。我們還研究了FcαR的內(nèi)吞基序，但意外地發(fā)現(xiàn)FcαR的內(nèi)吞序列并不存在于FcαR的胞內(nèi)區(qū)。綜上所述，我們證明了FcαR內(nèi)吞依賴于籠型蛋白和Dynamin，但不受Rab5調(diào)控，而且FcαR的內(nèi)吞基序不在膜內(nèi)區(qū)。
　　 第二部分
　　 FcαR在IgA介導(dǎo)的免疫反應(yīng)中發(fā)揮著重要作用。研

4、究發(fā)現(xiàn)，人血清和表達(dá)FcαR細(xì)胞的培養(yǎng)液上清中存在著可溶性的FcαR（sFcαR）。進(jìn)一步研究證實(shí)，sFcαR是FcαR的膜外區(qū)被酶切后脫落產(chǎn)生的，即所謂的受體脫落。但是，F(xiàn)cαR脫落的具體機(jī)制目前還不清楚。因此，我們研究了FcαR的脫落機(jī)制并找到了酶切FcαR膜外區(qū)產(chǎn)生sFcαR的蛋白酶。在使用化學(xué)抑制劑進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)中，EDTA、EGTA和廣譜金屬蛋白酶抑制GM6001能顯著抑制FcαR脫落，表明FcαR是被某一種或幾種金屬蛋白酶酶切的

5、。在293T細(xì)胞中過表達(dá).ADAM（adisintegrinandmetalloproteinase）10和ADAM17的負(fù)顯性突變體能明顯抑制FcαR脫落，表明FcαR脫落與這兩種金屬蛋白酶有關(guān)。最后，通過RNA干擾技術(shù)在天然表達(dá)FcαR的U937細(xì)胞中抑制內(nèi)源性ADAM10和ADAM17的表達(dá)水平，我們證明了ADAM10和ADAM17都參與了FcαR脫落。該研究鑒定出了導(dǎo)致FcαR脫落的蛋白酶，闡明了sFcαR產(chǎn)生的分子機(jī)制，這有助