上周感覺(jué)神經(jīng)元FC-epsilon-R I參與過(guò)敏性瘙癢發(fā)生的機(jī)制.pdf

1、背景與目的：癢覺(jué)是一種由內(nèi)部或外部刺激引起不適進(jìn)而引發(fā)搔抓意愿的感覺(jué)。瘙癢癥常見(jiàn)于皮膚、粘膜或系統(tǒng)性疾病，是困擾人類的健康難題之一。目前研究認(rèn)為，與痛的神經(jīng)機(jī)制類似，位于皮膚或粘膜的外周無(wú)髓鞘C類神經(jīng)纖維末梢的癢覺(jué)感受器被致癢介質(zhì)直接或間接激活產(chǎn)生癢覺(jué)。在各種瘙癢癥中，由過(guò)敏性疾病引起的過(guò)敏性瘙癢最為常見(jiàn)，而現(xiàn)有的抗過(guò)敏藥物治療往往效果欠佳。過(guò)敏性疾病的特征之一是血清或受累組織中抗原特異性免疫球蛋白（Immunoglobulin，Ig）

2、尤其是免疫球蛋白E(IgE)的增高。既往研究表明，部分外周痛覺(jué)傳入神經(jīng)元表達(dá)IgG Fc高親和力受體Fc-gamma-receptorⅠ(FcγRⅠ)，并可以被IgG免疫復(fù)合物特異性激活，從而直接引起痛覺(jué)神經(jīng)元興奮性升高和放電。有研究發(fā)現(xiàn)IgE的高親和力激活受體Fc-epsilon-receptorⅠ(FcεRⅠ)在部分外周感覺(jué)神經(jīng)元上表達(dá)。我們假設(shè)外周感覺(jué)神經(jīng)元表達(dá)的FcεRⅠ可以被IgE免疫復(fù)合物激活，從而參與過(guò)敏性瘙癢的發(fā)生。本研

3、究的目的是探討在外周感覺(jué)神經(jīng)元表達(dá)的FcεRⅠ參與過(guò)敏性瘙癢的發(fā)生機(jī)制。
　　材料與方法：采用雞卵清蛋白(OVA)和免疫佐劑（氫氧化鋁）皮下注射致敏小鼠。OVA致敏原滴眼激發(fā)過(guò)敏癥狀，建立小鼠過(guò)敏性眼部瘙癢模型。使用OVA和小鼠抗OVA IgE型抗體制備IgE-免疫復(fù)合物(IC)。采用在體和離體實(shí)驗(yàn)研究小鼠瘙癢相關(guān)行為、Fc受體在小鼠三叉神經(jīng)節(jié)(TG)感覺(jué)神經(jīng)元的表達(dá)以及IgE-IC通過(guò)激活TG感覺(jué)神經(jīng)元引起細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的變化

4、。
　　1、小鼠眼部瘙癢和疼痛行為的區(qū)分
　　(1)使用致痛劑滴眼并觀察小鼠眼部的疼痛相關(guān)行為。
　　(2)使用致癢劑滴眼并觀察小鼠眼部的瘙癢相關(guān)行為。
　　2、建立小鼠過(guò)敏性眼部瘙癢模型及瘙癢相關(guān)行為的測(cè)定
　　(1)滴加致敏原到過(guò)敏小鼠眼部，建立眼部瘙癢模型。
　　(2)提前給予過(guò)敏小鼠組胺H1受體拮抗劑或肥大細(xì)胞穩(wěn)定劑后再用致敏原激發(fā)，測(cè)定激發(fā)后眼部癢覺(jué)行為。
　　(3)提前過(guò)敏小鼠眼部給

5、予Anti-FcεRⅠα抗體后再給予致敏原激發(fā)，測(cè)定激發(fā)后眼部癢覺(jué)行為。
　　3、應(yīng)用免疫組織熒光、實(shí)時(shí)定量PCR(qPCR)和Western Blotting檢測(cè)FcεRⅠ和FcεRⅡ在小鼠TG感覺(jué)神經(jīng)元的表達(dá)。
　　4、分離培養(yǎng)C57BL/6小鼠TG神經(jīng)元，用鈣離子成像技術(shù)檢測(cè)不同濃度IgE-IC對(duì)TG神經(jīng)元細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的影響。
　　結(jié)果：
　　1、疼痛和瘙癢刺激分別在小鼠眼部引起不同的反射行為。

6、　　致痛劑（5μMCapsaicin）引起小鼠前爪在眼部明顯增加的拂掃(wiping)行為，而致癢劑（10μM BAM8-22）引起小鼠后爪在眼部明顯增加的搔抓(scratching)行為。
　　2、致敏原激發(fā)小鼠眼部過(guò)敏，引起過(guò)敏小鼠產(chǎn)生肥大細(xì)胞和組胺非依賴性的癢搔抓行為。
　　(1)0.1％、1％、5％ OVA溶液在過(guò)敏小鼠眼部引起濃度依賴性的搔抓（癢覺(jué)相關(guān)）行為。
　　(2)小鼠眼部過(guò)敏性瘙癢不能被肥大細(xì)胞穩(wěn)定劑

7、和組胺H1受體拮抗劑所完全抑制。
　　(3)在過(guò)敏性小鼠眼部滴加Anti-FcεRⅠα抗體能明顯抑制致敏原引起的眼部瘙癢。
　　3、FcεRⅠ的α、β、γ三個(gè)亞基都在離體培養(yǎng)的TG神經(jīng)元細(xì)胞上有表達(dá)。
　　4、FcεRⅠ在過(guò)敏性小鼠TG神經(jīng)元上表達(dá)增加
　　(1)過(guò)敏組TG神經(jīng)元表達(dá)的FcεRⅠα和β亞基蛋白水平明顯高于Naive（正常對(duì)照）組和OVA（非致敏）組小鼠TG神經(jīng)元。
　　(2)FcεRⅠα亞基

8、在小鼠TG的MrgprD+神經(jīng)元、MrgprA3+（癢覺(jué)特異性）神經(jīng)元上表達(dá)并在TG部分肽能神經(jīng)元和非肽能神經(jīng)元上有表達(dá)。
　　(3)過(guò)敏組小鼠TG神經(jīng)元表達(dá)的FcεRⅠγ亞基蛋白水平無(wú)明顯變化。
　　5、IgE-IC激活離體培養(yǎng)的TG神經(jīng)元
　　(1)IgE-IC細(xì)胞外給藥可引起正常和過(guò)敏小鼠TG小神經(jīng)元細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度增加，且具有劑量-反應(yīng)強(qiáng)度依賴性。
　　(2)與對(duì)照組比較，應(yīng)用FcεRⅠα siRNA使離

9、體培養(yǎng)的TG神經(jīng)元FcεRⅠα亞基表達(dá)降低。
　　(3)與對(duì)照組比較，IgE-IC細(xì)胞外給藥激活siRNA組神經(jīng)元的比例明顯降低且引起的細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度增加幅度也明顯降低。
　　6、IgE低親和力受體FcεRⅡ(CD23)在過(guò)敏性眼部瘙癢小鼠的TG神經(jīng)元上表達(dá)下降。
　　結(jié)論：我們的研究結(jié)果表明:
　　(1)小鼠TG感覺(jué)神經(jīng)元表達(dá)功能性的FcεRⅠ和FcεRⅡ。
　　(2)IgE-IC通過(guò)FcεRⅠα激活T

10、G感覺(jué)神經(jīng)元，引起細(xì)胞內(nèi)鈣增加。
　　(3)過(guò)敏性眼部瘙癢小鼠TG感覺(jué)神經(jīng)元FcεRⅠ表達(dá)增加，提高了TG感覺(jué)神經(jīng)元對(duì)IgE-IC的敏感度。
　　(4)外周感覺(jué)神經(jīng)元FcεRⅠ被IgE-IC激活可能直接參與了組胺非依賴性過(guò)敏性瘙癢的產(chǎn)生。
　　(5)TG神經(jīng)元FcεRⅠ和FcεRⅡ表達(dá)的失調(diào)可能參與小鼠眼部的過(guò)敏性瘙癢。
　　臨床意義：本項(xiàng)研究在小鼠過(guò)敏性眼結(jié)膜瘙癢模型上揭示了一個(gè)全新的關(guān)于過(guò)敏性瘙癢的機(jī)制:Ig