背根節(jié)感覺神經(jīng)元溫度敏感性的研究.pdf

1、本課題以大鼠急性離散的正常和受損DRG神經(jīng)元為實(shí)驗(yàn)對象，采用穿孔膜片鉗方法，給予不同溫度刺激，在電流鉗記錄下，研究單個(gè)中型DRG神經(jīng)元(D=30-40μm)的興奮性和溫度敏感性。通過去極化方波刺激觀察到在某一個(gè)膜電位水平的細(xì)胞的興奮性和溫度敏感性；通過去極化斜波刺激觀察在連續(xù)變化的膜電位水平下細(xì)胞的興奮性變化。在電壓鉗記錄下，檢測神經(jīng)元的全細(xì)胞電流。另外，初步分析了溫度敏感性神經(jīng)元的相關(guān)離子通道機(jī)制。研究結(jié)果主要包括三部分：　　第一部

2、分：正常和損傷中型DRG神經(jīng)元按反應(yīng)特征分類分類依據(jù)：方波和斜波去極化刺激下，放電數(shù)目，放電形式和放電頻率；SMPO的表現(xiàn)；動(dòng)作電位首先爆發(fā)的位置。方波超極化刺激下，有無反跳動(dòng)作電位的發(fā)生。分別檢測131個(gè)正常細(xì)胞和93個(gè)損傷細(xì)胞，這些中型細(xì)胞直徑=30-40μm，根據(jù)其反應(yīng)特征可分為3類：　　1.第1類神經(jīng)元：方波去極化刺激下，細(xì)胞只在刺激的起始處爆發(fā)單個(gè)動(dòng)作電位；細(xì)胞在方波和斜波去極化刺激下均無SMPO；在檢測中30/131個(gè)正常

3、中型細(xì)胞和16/93個(gè)損傷中型細(xì)胞屬于此類。 2.第2類神經(jīng)元：在方波和斜波去極化刺激下，細(xì)胞放電數(shù)目多；放電為簇狀；具有較高的頻率；在一定范圍內(nèi)隨著膜電位去極化水平增加，細(xì)胞的放電頻率也增加；在方波和斜波去極化刺激下，細(xì)胞出現(xiàn)簇狀、梭形的SMPO；方波超極化刺激下，細(xì)胞有反跳動(dòng)作電位。74/131個(gè)正常中型細(xì)胞和62/93個(gè)損傷中型細(xì)胞屬于此類，其中損傷模型出現(xiàn)的比例明顯高于正常標(biāo)本。 3.第3類神經(jīng)元：在斜波去極化刺

4、激下，放電為一短簇，具有較高的頻率；方波去極化刺激下，在刺激的起始處首先爆發(fā)單個(gè)動(dòng)作電位，放電局限于刺激起始段；該類細(xì)胞放電常伴有阻尼或一簇梭形的SMPO。方波超極化刺激下，細(xì)胞有反跳動(dòng)作電位。27/131個(gè)正常中型細(xì)胞和15/93個(gè)損傷中型細(xì)胞屬于此類。 第二部分：DRG中型神經(jīng)元對溫度變化的反應(yīng)特征通過溫度控制系統(tǒng)，給予不同溫度刺激即在20℃，24℃，28℃，32℃，36℃五個(gè)溫度測量點(diǎn)上，在方波去極化刺激下，觀察放電數(shù)目、

5、放電頻率、放電位置、放電閾電位和SMPO的幅值、產(chǎn)生SMPO的膜電位水平的改變；觀察在斜波去極化刺激下，細(xì)胞放電數(shù)目和頻率的改變；并在斜波去極化刺激下，電壓鉗下全細(xì)胞電流的變化。結(jié)果如下：1.隨溫度升高放電數(shù)增加的溫度敏感性神經(jīng)元(正向變化溫度敏感性神經(jīng)元)：其動(dòng)作電位數(shù)目隨溫度升高明顯增加，表現(xiàn)為溫度興奮性提高，降溫后興奮性又恢復(fù)，全細(xì)胞電流大小有變化。上述第2類細(xì)胞主要表現(xiàn)為正向變化溫度敏感性，而這類神經(jīng)元在正常和損傷模型中所占比例

6、近似。另外，隨著溫度升高此類細(xì)胞的興奮性反應(yīng)也完全不同，分別命名為周期節(jié)律放電型、非周期節(jié)律放電型和幅值衰減放電型。 2.隨溫度升高放電數(shù)減少的溫度敏感性神經(jīng)元(負(fù)向變化溫度敏感性神經(jīng)元)：其動(dòng)作電位數(shù)目隨溫度升高明顯減少，表現(xiàn)為溫度興奮性降低，降溫后興奮性又恢復(fù)，全細(xì)胞電流大小有較明顯的變化。第2類細(xì)胞中少部分神經(jīng)元表現(xiàn)為負(fù)向變化溫度敏感性，此類神經(jīng)元在損傷模型中占的比例較大。 3.溫度不敏感性神經(jīng)元，無論升溫或降溫刺

7、激，該類細(xì)胞的反應(yīng)性無明顯變化，全細(xì)胞電流無明顯變化。上述第1類和第3類細(xì)胞多表現(xiàn)為溫度不敏感。中型溫度不敏感性神經(jīng)元在損傷模型中占的比例較小。 第三部分：溫度敏感性神經(jīng)元的離子通道機(jī)制選擇20℃和32℃兩個(gè)溫度點(diǎn)上，主要觀察到Ih電流通道的阻斷劑以及辣椒素等對溫度敏感性神經(jīng)元反應(yīng)性的影響，初步分析了相關(guān)的離子通道機(jī)制和對辣椒素的反應(yīng)特性。 主要研究結(jié)論： 1.據(jù)放電反應(yīng)特征可將正常或損傷中型DRG神經(jīng)元分為3種

8、類型。第1類細(xì)胞，無SMPO，放電少。第2類和第3類細(xì)胞都具有簇狀的SMPO，放電頻率穩(wěn)定，對刺激斜率敏感。 2.3類細(xì)胞在正常和損傷模型中所占比例有明顯的差異：第1類：30/131(22.9％)和16/93(17.2％)；第2類：74/131(56.5％)和62/93(66.7％)；第3類：27/131(20.6％)和15/93(16.1％)。 3.在20～36℃范圍內(nèi)，正?；驌p傷中型DRG神經(jīng)元對溫度變化的反應(yīng)特征分