MEF2C調控大鼠脊髓背根節(jié)感覺神經元細胞P物質和低分子量神經絲微管蛋白表達的研究.pdf

1、目的：建立一種切實可行的胚胎大鼠背根神經節(jié)神經元培養(yǎng)及純化方法，研究MEF2C在背根神經節(jié)神經元細胞內表達對P物質和低分子量神經絲微管蛋白基因表達的影響以及MEF2C與氣道高反應性發(fā)生間可能的關系。 方法：利用顯微解剖獲取足夠數量的胚胎大鼠背根神經節(jié)，通過胰蛋白酶+EDTA消化、交替使用NB培養(yǎng)基與加入了5-氟-2-脫氧尿嘧啶核苷酸/尿苷的抗有絲分裂NB培養(yǎng)基等方法在體外獲得純化的背根神經節(jié)神經元，采用神經絲蛋白免疫細胞化學染色

2、法與DAPI染核的方法鑒定并測定神經元的純度。分離培養(yǎng)背根神經節(jié)神經元細胞，然后暴露于不同濃度的NGF下24小時，最后用實時聚合酶鏈反應技術檢測P物質與低分子量神經絲微管蛋白基因在背根神經節(jié)神經元細胞內的表達。通過化學轉染方法將合成的3條siRNA-Mef2c分別轉染PC12細胞，并用實時聚合酶鏈反應技術篩選轉染效率最高的siRNA。采用化學轉染方法干擾背根神經節(jié)神經元細胞內MEF2C的表達，在高濃度神經生長因子刺激背根神經節(jié)神經元細胞

3、后采用實時聚合酶鏈反應技術檢測干擾后背根神經節(jié)神經元細胞內P物質與低分子量神經絲微管蛋白基因的表達。 結果： 1、獲得的背根神經節(jié)神經元在體外生長良好，純度可達到96％以上。 2、P物質及低分子量神經絲微管蛋白基因表達隨刺激用神經生長因子濃度的升高而升高。 3、使用化學轉染方法成功的干擾了背根神經節(jié)神經元細胞內MEF2C的表達，Mef2c較對照組下降50％，同時沒有檢測到對Creb表達的影響。實驗組背根神

4、經節(jié)神經元細胞內P物質在RNA水平較對照組下降了41％，而低分子量神經絲微管蛋白在RNA水平較對照組下降了61％。 結論： 1、本實驗原代培養(yǎng)方法能獲得大量高度純化的大鼠背根神經節(jié)神經元。 2、神經生長因子促進大鼠脊髓背根節(jié)感覺神經元內P物質與低分子量神經絲微管蛋白的合成。 3、胚大鼠背根神經節(jié)神經元細胞內P物質及低分子量神經絲微管蛋白基因表達受到MEF2C的調控， MEF2C可能是參與了氣道高反應性發(fā)生