NGF誘導(dǎo)感覺神經(jīng)元細胞iNOS及SP的表達及IRF-1的調(diào)控作用.pdf

1、目的：呼吸道合胞病毒(RSV)感染后肺組織內(nèi)NGF等神經(jīng)營養(yǎng)因子表達水平顯著增高,抗NGF可減輕RSV感染致氣道神經(jīng)源性炎癥,提示NGF等神經(jīng)營養(yǎng)因子可能是RSV感染后神經(jīng)源性炎癥的主要因子,本課題研究神經(jīng)生長因子(NGF)誘導(dǎo)后的感覺神經(jīng)元細胞內(nèi)誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)及P物質(zhì)(SP)的表達及干擾素調(diào)節(jié)因子-1(IRF-1)的調(diào)控作用,以期進一步闡明呼吸道合胞病毒感染后氣道神經(jīng)源性炎癥的細胞內(nèi)轉(zhuǎn)錄調(diào)控機制。
　　 方法：

2、在培養(yǎng)背根神經(jīng)節(jié)感覺神經(jīng)元細胞(DRGn)、PC12細胞的基礎(chǔ)上,將兩種細胞各分為5個組,即①空白對照組；②NGF(100ng/mL)組；③陽性對照組:NGF(100ng/mL)+IFN-γ(100u/mL)組；④陰性干擾組:陰性對照vshRNA干擾+NGF(100ng/mL)組(NC-GFP-LV+NGF組)；⑤干擾組:IRF-1-vshRNA干擾+NGF(100ng/mL)組(IRF-1-RNAi-LV+NGF組)。其中PC12細胞

3、預(yù)先用NGF50ng/mL處理,第④及第⑤組采用慢病毒IRF-1 siRNA預(yù)處理。然后各組暴露于NGF(100ng/mL)下16小時,最后采用實時熒光定量PCR法檢測經(jīng)不同處理后各組細胞內(nèi)SPmRNA和iNOSmRNA表達的水平；Western blot方法檢測iNOS蛋白在不同處理組細胞中的表達情況。
　　 結(jié)果：⑴NGF組,NGF+IFN-γ組及陰性對照vshRNA干擾+NGF組較正常空白對照組而言,各組細胞內(nèi)SPmRNA

4、及iNOSmRNA,蛋白表達水平均明顯升高(p＜0.05)；⑵與單純NGF組相比,NGF+IFN-γ組細胞內(nèi)SPmRNA表達水平無明顯變化(p＞0.05),而iNOSmRNA表達水平明顯升高(p＜0.05)；⑶經(jīng)慢病毒IRF-1 shRNA阻斷IRF-1表達后,細胞內(nèi)SPmRNA及iNOSmRNA,iNOS蛋白表達水平,較單純NGF刺激組而言明顯降低(p＜0.05)。
　　 結(jié)論：NGF通過IRF-1調(diào)控感覺神經(jīng)元細胞內(nèi)SP及i