IRF-1調(diào)控IFP35表達及抑制BFV復制作用機制初探.pdf

1、干擾素調(diào)節(jié)因子(IRFs)和核因子κB(NF-κB)是細胞中兩類重要的轉(zhuǎn)錄因子，對于細胞的先天免疫應答至關(guān)重要。目前在人的細胞中共發(fā)現(xiàn)了9個IRFs，即IRF-1到IRF-9。其中，IRF-1是首個被發(fā)現(xiàn)的IRFs家族成員，其靶蛋白參與了細胞內(nèi)多種生物學功能的調(diào)控，包括抗病毒、抗增殖及細胞凋亡等。NF-κB能夠調(diào)控干擾素-β、炎癥因子以及白介素等基因的表達，在細胞的免疫應答及炎癥反應中發(fā)揮著重要的作用。
　　泡沫病毒(FVs)是一

2、類特殊的反轉(zhuǎn)錄病毒，與其他反轉(zhuǎn)錄病毒相比，F(xiàn)Vs的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機制及生活周期具有諸多獨特之處。FVs在體外培養(yǎng)的細胞中能夠引起強烈的細胞病變，在其天然宿主中卻處于潛伏感染狀態(tài)，并不引發(fā)任何癥狀。目前關(guān)于FVs處于潛伏感染狀態(tài)的具體機制尚不清楚。本室前期研究發(fā)現(xiàn)牛泡沫病毒(BFV)通過激活HeLa細胞的NF-κB通路上調(diào)了RelB的表達，RelB作為BFV反式激活因子BTas的輔因子增強了BTas介導的對LTR的反式激活作用，進而促進了BFV

3、的復制。然而，NF-κB的激活并不能使BFV由潛伏感染狀態(tài)向裂解感染狀態(tài)轉(zhuǎn)換，推測BFV有可能通過NF-κB激活了其他抗病毒因子。此外，本室前期研究發(fā)現(xiàn)，干擾素誘導蛋白IFP35可以抑制BFV的復制，但BFV感染對IFP35表達的影響尚不清楚。本文即對BFV與宿主的相互作用展開了進一步的研究，以期了解BFV活化NF-κB后是否會激活I(lǐng)FP35或其他抗病毒因子的表達，從而為揭示BFV處于潛伏感染狀態(tài)的機制提供線索。
　　為了便于研究

4、BFV感染對IFP35表達的影響，我們對IFP35的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機制進行了較為詳細的分析，發(fā)現(xiàn)IFP35可以被IRF-1、IRF-2及組成活化型的IRF-3及IRF-7誘導表達。其中IRF-1可以直接結(jié)合在IFP35啟動子的干擾素刺激應答元件(ISRE)上，參與了IFP35的組成型表達，并介導了Ⅰ型干擾素和Ⅱ型干擾素對IFP35的誘導。此外，我們發(fā)現(xiàn)雖然IFP35的啟動子區(qū)域沒有NF-κB結(jié)合位點，但是NF-κB通路上游的激酶NIK可以通過

5、激活I(lǐng)RF-1，進而通過上述機制上調(diào)IFP35的表達水平。
　　鑒于IRF-1在IFP35轉(zhuǎn)錄調(diào)控中的重要性，我們研究了BFV感染對IRF-1表達的影響，發(fā)現(xiàn)在HeLa細胞中BFV的反式激活因子BTas可以通過NF-κB通路上調(diào)IRF-1的表達水平。隨后，對IRF-1對BFV復制的影響進行分析，發(fā)現(xiàn)在HeLa和293T細胞中過表達IRF-1均可以強烈地抑制BFV的復制，且其抑制BFV復制的能力遠強于IFP35。此外，與IFP35類

6、似，在293T細胞中過表達IRF-1也可以抑制BTas介導的對LTR的反式激活作用，但是不同于IFP35，IRF-1還可以抑制BTas介導的對內(nèi)部啟動子IP的反式激活作用，表明IRF-1抑制BFV復制的作用并不完全通過誘導IFP35的表達來實現(xiàn)。鑒于IRF-1是一個重要的轉(zhuǎn)錄因子，可以調(diào)控諸多干擾素誘導基因(ISGs)的表達，這些ISGs共同作用抑制了BFV的復制。因此，我們初步檢測了IFITM1、IFITM3、IFIT3、ISG15和

7、MxA等IRF-1的靶蛋白對BFV復制的影響，結(jié)果顯示上述ISGs對BFV的抑制作用并不十分顯著，不是IRF-1抑制BFV復制過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用的ISGs。
　　綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)BFV感染后，病毒在活化NF-κB通路促進自身基因表達的同時，觸發(fā)了細胞的天然免疫防御機制，細胞通過上調(diào)IRF-1的表達，強烈地抑制BFV的復制;IFP35是IRF-1行使抑制作用的效應基因之一;IRF-1是BFV在HeLa細胞中處于潛伏感染狀態(tài)的重要