人Fcα-μR的表達(dá)與功能的初步研究.pdf

1、人Fcα/μR是IgA和IgM的Fc受體，能與多聚體IgM/IgA結(jié)合，因此可能在系統(tǒng)免疫和粘膜免疫中都有重要的作用。其基因位于1號染色體lq32，毗鄰其它FcR基因，包括PolyImmunoglobulinReceptor(pIgR)。經(jīng)蛋白序列分析，F(xiàn)cα/μR是Ⅰ型跨膜蛋白，其膜外區(qū)有三個結(jié)構(gòu)域組成，一個短的EC1區(qū)、一個免疫球蛋白樣結(jié)構(gòu)域的EC2區(qū)和一個特殊的EC3區(qū)。EC2區(qū)與pIgR胞外第一個結(jié)構(gòu)域(D1)同源性很高，預(yù)測是

2、結(jié)合IgM/IgA的區(qū)域。據(jù)報道，人Fcα/μR表達(dá)在扁桃體生發(fā)中心的濾泡樹突狀細(xì)胞、腎遠(yuǎn)曲小管和小腸潘氏細(xì)胞。 為了研究Fcα/μR的性質(zhì)，需要得到正確折疊的受體，而原核細(xì)胞表達(dá)的Fcα/μR以包涵體形式存在，難以以復(fù)性方式得到正確折疊的可溶性受體。為此本研究嘗試了用酵母和哺乳細(xì)胞真核表達(dá)Fcα/μR。 在畢赤酵母中分泌表達(dá)的人Fcα/μR的膜外區(qū)在C端帶MycHis6標(biāo)簽，可以用Ni柱親和純化。經(jīng)WesternBlo

3、t鑒定，得到多個特異性條帶(32—47、50、80、140kDa)，本文推測32—47kDa條帶是部分降解的目的蛋白，80kDa和140kDa條帶是二聚體或多聚體的目的蛋白，這種預(yù)測還需進(jìn)一步證實。 用CHO細(xì)胞系瞬時表達(dá)Fcα/μR野生型、膜外區(qū)以及C端帶EGFP標(biāo)簽的融合蛋白，經(jīng)WesternBlot鑒定表明，這三種蛋白在CHO細(xì)胞中都以單體形式表達(dá)。通過細(xì)胞免疫組化和激光共聚焦分析顯示，F(xiàn)cα/μR主要表達(dá)在CHO細(xì)胞的胞

4、漿。另外，還嘗試用G418篩選的方法建立穩(wěn)定表達(dá)Fcα/μR的CHO細(xì)胞株，經(jīng)細(xì)胞免疫組化分析，藥壓得到的細(xì)胞陽性率為40％左右。FACS檢測顯示，在不打孔和0.2％皂苷打孔的情況下，CHO表達(dá)的Fcoα/μR都不能結(jié)合IgA/IgM。其原因可能是Fcα/μR在CHO細(xì)胞中僅以單體形式表達(dá)，無法以成熟的二聚體形式結(jié)合配體。 人Fcα/μR與pIgR的基因定位相鄰近，結(jié)合配體的結(jié)構(gòu)域同源性高，且配體都是多體的IgA和IgM，因此F

5、cα/μR也可能在粘膜免疫中發(fā)揮作用。為了研究Fcα/μR在粘膜系統(tǒng)的表達(dá)情況及其與pIgR的相互關(guān)系，檢測了人乳腺癌細(xì)胞系MCF—7Fcα/μR表達(dá)情況。用RT-PCR、FACS、細(xì)胞組化和免疫熒光的方法檢測到MCF—7細(xì)胞上同時有Fcα/μR和pIgR的表達(dá)，且MCF—7能特異性結(jié)合多體IgA/IgM。用兔抗人Fcα/μR和兔抗人pIgR多抗在免疫熒光中可檢測到MCF—7表達(dá)的Fcα/μR和pIgR。 結(jié)論: 本項工作用酵母