CMKLR1過表達(dá)在大鼠非酒精性脂肪性肝炎脂肪組織中的作用及意義.pdf

1、目的：
　　高脂飲食喂養(yǎng)的SD雄性大鼠為研究對象，觀察慢病毒介導(dǎo)的CMKLR1過表達(dá)在SD大鼠非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis,NASH)脂肪組織中的作用以及意義。
　　方法：
　　提前制作攜帶有大鼠趨化因子樣受體1（chemokine-like receptor1,CMKLR1）基因慢病毒載體的構(gòu)建以及評定。雄性SD大鼠42只，在動物房適應(yīng)飼養(yǎng)7天后，隨機將所有大鼠分成四

2、個組：?對照12只；?模型12只；?轉(zhuǎn)染12只；④空轉(zhuǎn)染6只，對照組普通飲食喂養(yǎng)，其余高脂肪含量飲食喂養(yǎng)。在實驗第1天，對照及模型組于尾靜脈注射磷酸鹽緩沖液（phosphate-buffered saline,PBS)100ul，轉(zhuǎn)染組于尾靜脈注射病毒液100ul，空轉(zhuǎn)染組于尾靜脈注射空病毒液100ul。在實驗第7、14、20天空轉(zhuǎn)染組各取2只處死，評價轉(zhuǎn)染效率。每周記錄大鼠體重；實驗第8、12周，各組隨機取6只老鼠禁飲食12小時后，水

3、合氯醛腹腔麻醉，迅速剪開腹腔，觀察肝臟形態(tài)學(xué)變化，腹主動脈取血，取腎周脂肪組織,置液氮中冷凍，然后轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱凍存,保存肝組織行蘇木精-伊紅（hematoxylin and eosin staining,HE）染色；檢測血中凱莫瑞、脂聯(lián)素含量；RT-PCR法檢測脂肪組織中CMKLR1、脂聯(lián)素 mRNA的含量；蛋白免疫印跡法測各組大鼠脂肪組織中CMKLR1和脂聯(lián)素的蛋白含量。
　　結(jié)果：
　?。?）模型大鼠與同時期對照和

4、轉(zhuǎn)染大鼠體重及肝指數(shù)相比明顯升高(P<0.05)。（2）肝臟HE結(jié)果顯示：對照組大鼠的肝細(xì)胞按一定的順序排列、肝細(xì)胞條索結(jié)構(gòu)清楚、放射狀排列；模型組8周出現(xiàn)了單純性脂肪肝，肝細(xì)胞體積變大，肝細(xì)胞紊亂排列，未見肝竇出現(xiàn)，肝小葉周邊的肝臟細(xì)胞呈現(xiàn)局灶脂肪變性的表現(xiàn)；12周呈現(xiàn)了肝臟重度脂肪肝，視線內(nèi)絕大多數(shù)的肝細(xì)胞呈現(xiàn)大泡脂滴為主的混合脂肪變改變，可以看到炎性細(xì)胞的出現(xiàn)及點狀壞死，已發(fā)展到NASH；轉(zhuǎn)染組較同期模型大鼠病理程度減輕，與對照組

5、接近。（3）模型組比同期對照組大鼠血清中凱莫瑞水平上升（P>0.05），轉(zhuǎn)染組比同期模型組血清中凱莫瑞水平上升(P<0.05)。（4）8周時模型組比同期對照大鼠循環(huán)血中脂聯(lián)素水平降低(P<0.05)，12周時進一步降低，轉(zhuǎn)染組較同期模型組循環(huán)血中脂聯(lián)素水平上升。（5）PCR提示，同時期的模型組與對照組相比,脂肪組織中CMKLR1 mRNA含量上升（P>0.05），轉(zhuǎn)染組比同期模型大鼠CMKLR1 mRNA含量明顯增多（P<0.05）；模

6、型組與同期對照組相比脂肪組織中脂聯(lián)素 mRNA含量下降，轉(zhuǎn)染組比同期模型組相比增多（P<0.05）。（6）蛋白免疫印跡結(jié)果提示，同時期的模型組與對照組大鼠相比，脂肪組織中CMKLR1蛋白含量上升（P>0.05），轉(zhuǎn)染組與同期模型組相比含量明顯增加（P<0.05）；模型組大鼠與同時期對照組相比脂肪組織脂聯(lián)素蛋白含量表達(dá)下降，轉(zhuǎn)染組與同時期模型大鼠相比明顯增高（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　用高脂肪含量的飼料喂養(yǎng)12周成功創(chuàng)