游泳訓(xùn)練防治非酒精性脂肪性肝炎的效果及機(jī)制研究.pdf

1、非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholic fatty liver disease，NAFLD)是一種肝組織病理學(xué)改變與酒精性肝病相類似，但無過量飲酒史的臨床綜合征，隨病程的進(jìn)展而表現(xiàn)不一，包括單純性脂肪肝(steatosis)、非酒精性脂肪性肝炎(nonalcoholic steatohepatitis，NASH)、肝硬化(cirrhosis)三個階段。NASH是NAFLD的一個重要階段，如能積極預(yù)防，或在發(fā)病后給予積極干預(yù)，NAS

2、H會向單純脂肪變性階段轉(zhuǎn)化，甚至可能恢復(fù)正常；反之，NASH可能會發(fā)展為肝纖維化，甚至肝硬化。 目前對于NASH的治療研究以藥物為主，各種藥物治療方法雖有一定效果，但同時存在各種不足。而適宜的運動訓(xùn)練可增強(qiáng)脂肪酸代謝、提高抗氧化物、提高胰島素敏感性以及減少炎性因子，故從理論上推測其可能在預(yù)防和治療NASH中發(fā)揮作用。然而，國內(nèi)外尚未見到關(guān)于運動預(yù)防NASH的文獻(xiàn)報道。治療方面，針對單純性脂肪肝階段的研究較多，而對于炎癥階段的研究

3、較少，并且在有限的研究中多使用綜合干預(yù)因素，因此運動本身起到的作用不得而知。 本研究通過游泳訓(xùn)練干預(yù)的方式，探討其對NASH的防治效果。通過觀察肝臟組織切片，并對脂肪變性程度和炎癥活動度評分，判定游泳訓(xùn)練防治NASH的效果，同時測量胰島素敏感指數(shù)、血清及肝臟游離脂肪酸(FFA)、血清腫瘤壞死因子a(TNF．0【)、肝臟丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)、肝臟TNF‘0【mRNA、過氧化物酶體增殖物激活受體(PPAR)0【

4、mRNA以及細(xì)胞色素P4502E1(CYP2E1)mRNA等指標(biāo)，探討游泳訓(xùn)練防治NASH的作用機(jī)制，同時探討NASH的發(fā)病機(jī)理，以期為預(yù)防和治療NASH開辟新思路和新途徑。 實驗分為兩部分：預(yù)防實驗和治療實驗。 一、預(yù)防實驗 Sprague-Dawley(SD)~系雄性大鼠30只隨機(jī)分為四組：對照組(C)6只，喂以普通飼料，不進(jìn)行游泳訓(xùn)練；高脂組(H)8只，喂以高脂飼料(普通飼料基礎(chǔ)上添加2％膽固醇和10％豬

5、油)，不進(jìn)行游泳訓(xùn)練；高脂運動組(HE)8只，喂以高脂飼料，進(jìn)行游泳訓(xùn)練(90min/d，5d/w)；運動組(E)8只，喂以普通飼料，進(jìn)行游泳訓(xùn)練。12周末處死，比較各組肝臟脂肪變性程度和炎癥活動度、血清和肝臟生化以及分子生物學(xué)指標(biāo)，結(jié)果如下： 1．肝組織學(xué)指標(biāo)：光鏡下，H組大鼠呈現(xiàn)廣泛大泡性脂肪變性和嚴(yán)重的炎性細(xì)胞浸潤，脂肪變性程度及炎癥活動度評分均大于C組，差異非常顯著(P

6、出現(xiàn)輕微炎癥細(xì)胞浸潤，脂肪變性程度及炎癥活動度評分均小于H組，差異非常顯著(P<0．01)；HE組大鼠肝臟脂肪變性程度及炎癥活動度評分均大于E組，差異非常顯著(P<0.01)。提示，同時進(jìn)行游泳訓(xùn)練可以有效預(yù)防NASH形成。 2．血清學(xué)指標(biāo)：H組大鼠血清甘油三酯(TG)、FFA、TNF-α、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)和總膽固醇(TC)均高于C組，差異非常顯著或顯著(P<0.01或P<0.05)；與H組相比，HE組血清TG

7、、FFA和TNF-α水平降低，差異非常顯著或顯著(P<0.01或P<0.05)，兩組ALT、ASX、和TC無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)；H組胰島素敏感指數(shù)小于C組，而HE組大于H組，差異均非常顯著(P<0.01)；與HE組比，E組血清TG、TC和AST水平降低，胰島素敏感指數(shù)升高，差異非常顯著或顯著(P<0.01或P<0.05)；與C組相比，E組血清FFA降低，胰島素敏感指數(shù)升高，差異非常顯著或顯著(P<0.01或P<0.05)。提示，

8、同時進(jìn)行游泳訓(xùn)練可以預(yù)防高脂飲食造成的高血脂，提高胰島素敏感性。 二、治療實驗 Sprague-Dawley(SD)純系雄性大鼠50只隨機(jī)分為7組：普通飼料喂養(yǎng)12周組(C<,12>)，普通飼料喂養(yǎng)20周組(C<,20>)，高脂飼料喂養(yǎng)12周組(H<,12>)，高脂飼料喂養(yǎng)20周組(H<,20>)，12周高脂喂養(yǎng)后改8周普通飼料喂養(yǎng)組(HD<,20>)，12周高脂喂養(yǎng)后進(jìn)行8周游泳運動治療組(HE<,20>)，12周高脂

9、飲食后改8周普通喂養(yǎng)加游泳運動治療組(HDE<,20>)。高脂飲食成份同預(yù)防實驗，游泳訓(xùn)練為60min/d，5d/w。分別于12周末和20周末處死相應(yīng)組大鼠，測試相關(guān)指標(biāo)，結(jié)果如下： 1．12周組間指標(biāo)比較：H<,12>組出現(xiàn)嚴(yán)重的肝臟脂肪變性和炎癥細(xì)胞浸潤，與C<,12>組比，H<,12>組脂肪變性程度和炎癥活動度加重，體重、肝重、肝臟指數(shù)、血清TG、ALT和AST水平升高，胰島素敏感指數(shù)下降，差異呈非常顯著或顯著性(P<0.

10、01或P<0.05)，提示造模成功。 2．20周肝組織學(xué)比較：H<,20>組出現(xiàn)嚴(yán)重的肝臟脂肪變性和炎癥細(xì)胞浸潤，與C<,20>組比，H<,20>組脂肪變性程度和炎癥活動度較嚴(yán)重，差異非常顯著(P<0.01)；與H<,20>組比，HD<,20>組、HE<,20>組和HDE<,20>組肝臟脂肪變性程度減輕，差異均非常顯著(P<0.01)，炎癥活動度也均有所減輕，但與H<,20>組比，HD<,20>組、HDE<,20>組差異非常顯著

11、或顯著(P<0.01或P<0.05)，HE<,20>組無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。提示，NASH形成后再進(jìn)行游泳訓(xùn)練對改善脂肪變性有作用，但對于炎癥無明顯改善效果。 3．20周血清學(xué)指標(biāo)比較：與C<,20>組比，H<,20>組血清FFA、TNF-α、ALT、AST和TC均升高，胰島素敏感指數(shù)下降，差異非常顯著或顯著(P<0.01或P<0.05)，血清TG無顯著性差異(P>0.05)；與H<,20>組比，HE<,20>組血清F

12、FA、ALT、AST、TG和TC均下降，胰島素敏感性提高，差異非常顯著或顯著(P<0.01或P<0.05)，血清TNF-α無顯著性變化(P>0.05)；與H<,20>組比，HDE<,20>組血清FFA、TNF-α、ALT、AST和TC均降低，差異非常顯著或顯著(P<0.01或P<0.05)，胰島素敏感指數(shù)和血清TG無顯著性差異(P>0.05)；與H<,20>組比，HD<,20>組血清FFA、TNF-α、ALT、AST和TC均降低，胰島素

13、敏感性提高，差異非常顯著或顯著(P<0.01或P<0.05)，血清TG無顯著性差異(P>0.05)。提示，NASH形成后再進(jìn)行游泳訓(xùn)練能夠降低血脂，提高胰島素敏感性。 4.20周肝組織生化指標(biāo)比較：與C<,20>組比，H<,20>組肝FFA、MDA升高，SOD降低，差異非常顯著或顯著(P<0.01或P<0.05)；與H<,20>組比，HE<,20>組肝FFA下降，肝SOD升高，差異均非常顯著(P<0.01)，肝MDA無顯著性差異

14、(P>0.05)；與H<,20>組比，HDE<,20>組肝FFA和MDA下降，肝SOD升高，差異非常顯著或顯著(P<0.01或P<0.05)；與H<,20>組比，HD<,20>組肝FFA和MDA下降，差異均非常顯著(P<0.01)，肝SOD無顯著性差異(P>0.05)。提示，NASH形成后再進(jìn)行游泳訓(xùn)練不能明顯改善肝臟脂質(zhì)過氧化。 5．20周肝組織分子生物學(xué)指標(biāo)比較：與C<,20>組比，H<,20>組肝TNF-αmRNA和CYP

15、2El mRNA表達(dá)升高，肝PPARα mRNA表達(dá)降低，差異均非常顯著(P<0.01)：與H<,20>組相比，HE<,20>組肝TNF-αmRNA和CYP2El mRNA表達(dá)降低，肝PPARα mRNA表達(dá)升高，差異非常顯著或顯著(P<0.01或P<0.05)；與H<,20>組比，HDE<,20>組肝TNF-α mRNA和CYP2El mRNA表達(dá)降低，肝PPARα mRNA表達(dá)升高，差異均非常顯著(P<0.01)；與H<,20>組相

16、比，HD<,20>組肝TNF-αmRNA表達(dá)降低，肝PPARα mRNA表達(dá)顯著升高，差異非常顯著或顯著(P<0.01或P<0.05)，肝CYP2El mRNA表達(dá)無顯著性差異(P>0.05)。提示，NASH形成后再進(jìn)行游泳訓(xùn)練可以降低肝TNF-αmRNA和CYP2El mRNA的高表達(dá)，升高pPARα mRNA的低表達(dá)。 結(jié)論： 1．12周的高脂飲食(普通飲食基礎(chǔ)上添加10％的豬油和2％的膽固醇)可以成功復(fù)制大鼠NAS

17、H模型，可能的發(fā)病機(jī)制為：①降低胰島素敏感性；②升高血清FFA、TG、TNF-α和肝臟FFA；③增強(qiáng)肝臟氧化應(yīng)激和脂質(zhì)過氧化；④提高肝臟1NF-α和CYP2El的mRNA表達(dá)，降低肝臟PPARα的mRNA表達(dá)； 2．游泳訓(xùn)練可以有效預(yù)防12周高脂飲食造成的大鼠NASH； 3．8周游泳訓(xùn)練可以在一定程度上逆轉(zhuǎn)12周高脂飲食造成的NASH大鼠的肝臟脂肪變性，但對肝臟內(nèi)形成的炎癥浸潤無明顯作用； 4．游泳訓(xùn)練防治大鼠N