非酒精性脂肪性肝炎大鼠內(nèi)毒素性肝損傷機(jī)制及中藥對(duì)其影響.pdf

1、目的：非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis，NASH)是指具有與酒精性脂肪性肝炎(alcoholic steatohepatitis，ASH)相同的病理改變，卻沒有習(xí)慣性飲酒史，也不是肝炎病毒所致的一類肝臟疾病。NASH的發(fā)病機(jī)制至今還不明確，目前認(rèn)為其發(fā)病主要可能與以下幾種因素有關(guān)：脂質(zhì)代謝紊亂、氧化應(yīng)激作用、脂質(zhì)過氧化作用、胰島素抵抗和細(xì)胞因子的釋放等。 近年來，越來越多的研究顯示腸

2、源性內(nèi)毒素血癥(intestinalendotoxaemia，IETM)是非酒精性脂肪性肝炎的發(fā)病機(jī)制之一。本試驗(yàn)通過觀察NASH模型大鼠外周血內(nèi)毒素水平、肝組織內(nèi)毒素受體表達(dá)及其與肝臟病理學(xué)的關(guān)系，并進(jìn)一步探討了疏肝祛瘀通絡(luò)降濁法對(duì)NASH可能的作用途徑，旨在闡明腸源性內(nèi)毒素血癥在NASH發(fā)病中的作用和探索中藥治療的新方法。 方法： 將雄性SD大鼠隨機(jī)分為7組即模型組(M)、低劑量治療組(LT)、中劑量治療組(MT)、

3、高劑量治療組(HT)、陽(yáng)性對(duì)照組(D)、預(yù)防組(P)和正常組(C)。用喂飼高脂飲食的方法復(fù)制大鼠非酒精性脂肪性肝炎的動(dòng)物模型。4周后用疏肝祛瘀通絡(luò)降濁法分低、中、高劑量和立普妥分別進(jìn)行治療，預(yù)防組則從第1周開始用中劑量的中藥進(jìn)行干預(yù)，12周后處死大鼠測(cè)定其血清甘油三酯(triglyceride，TG)、總膽固醇(total cholesterol，TC)、低密度脂蛋白(low-density lipoprotein，LDL)、高密度脂蛋

4、白(high-density lipoprotein，HDL)、丙氨酸轉(zhuǎn)移酶(alanine aminotransferase，ALT)、內(nèi)毒素(endotoxin，ET)、腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor α，TNF-α)和白細(xì)胞介素(interleukin-1β，IL-1β)的含量；HE染色法和蘇丹Ⅲ染色法觀察肝組織病理學(xué)變化；免疫組織化學(xué)法觀察肝組織CD<,14>和核轉(zhuǎn)錄因子(nuclear transcr

5、iptional factor κB，NF-κB)的表達(dá)；逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈(reverse transcription polymerase chain reaction，RT-PCR．)法觀察脂多糖結(jié)合蛋白(lipopolysaccharide binding protein，LBP)和4型Toll樣受體(tolllike receptor-4，TLR-4)mRNA的表達(dá)。同期正常飲食飼養(yǎng)大鼠作對(duì)照。 結(jié)果： (1)血清

6、學(xué)指標(biāo)：實(shí)驗(yàn)第12周中劑量治療組大鼠血清ALT水平就已經(jīng)明顯降低，與模型組相比差異有顯著意義。其他各組大鼠ALT水平較模型組有所降低但差異均無顯著意義。中劑量治療組和陽(yáng)性對(duì)照組大鼠血清12周TG水平明顯下降，與模型組相比差異有顯著意義。其他各組大鼠TG水平較模型組有所降低但差異無顯著意義。各組大鼠血清TC水平在12周時(shí)均較模型組明顯降低，差異均有顯著意義。12周時(shí)低劑量治療組、中劑量治療組、陽(yáng)性對(duì)照組和預(yù)防組大鼠血清LDL水平明顯下降，

7、與模型組相比差異有顯著意義。高劑量治療組大鼠LDL水平與模型組一致處于較高水平。中劑量治療組和預(yù)防組大鼠血清HDL水平在12周時(shí)明顯高于模型組，差異有顯著意義。其他各組大鼠HDL水平與模型組相比無顯著性差異。第12周時(shí)，模型組大鼠腹主動(dòng)脈血清內(nèi)毒素水平較正常組明顯升高，有顯著性差異；低劑量治療組和中劑量治療組大鼠的血清內(nèi)毒素水平明顯低于模型組，差異均有顯著意義；高劑量治療組、陽(yáng)性對(duì)照組和預(yù)防組大鼠血清內(nèi)毒素水平稍低于模型組，但差異無顯著

8、性意義。12周時(shí)中劑量治療組大鼠血清TNF-α水平明顯低于模型組且差異有顯著意義，其他各組大鼠血清TNF-α水平稍低于模型組但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。12周時(shí)低劑量治療組、中劑量治療組、高劑量治療組和預(yù)防組大鼠血清IL-1β水平明顯低于模型組且差異有顯著意義，陽(yáng)性對(duì)照組大鼠血清IL-1β水平幾乎與模型組無差別。 (2)肝組織病理學(xué)變化：實(shí)驗(yàn)12周時(shí)中劑量治療組大鼠脂肪變的肝細(xì)胞數(shù)量較模型組明顯減少，匯管區(qū)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)消失，與正常組相比差異

9、無顯著性。低劑量治療組、陽(yáng)性對(duì)照組和預(yù)防組大鼠肝細(xì)胞脂肪變性和匯管區(qū)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)有所減輕，但與正常組相比仍有顯著性差異。高劑量治療組大鼠肝細(xì)胞脂肪變性和匯管區(qū)炎癥浸潤(rùn)的程度與模型組無差別。但各組仍未發(fā)現(xiàn)有竇周和間隔的纖維化的存在。 (3)肝組織免疫組化染色：正常組大鼠肝組織僅有少量CD<,14>陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)，主要位于肝竇內(nèi)；12周時(shí)，模型組大鼠肝組織CD<,14>陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量明顯增多，主要分布于肝竇內(nèi)，部分呈灶型聚集，同時(shí)也分布

10、于肝小葉中央靜脈周圍。與模型組相比，中劑量治療組大鼠肝組織CD<,14>陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量明顯減少。其他各組大鼠肝組織CD<,14>陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量與模型組沒有差異。12周模型組和高劑量治療組可見少量細(xì)胞核染色的NF-κB陽(yáng)性細(xì)胞散在分布于匯管區(qū)，正常組、低劑量治療組、中劑量治療組、陽(yáng)性對(duì)照組和預(yù)防組均未見NF-κB陽(yáng)性染色細(xì)胞。 (4)肝組織LBP和TLR-4mRNA的表達(dá)：正常組大鼠肝組織也有LBPmRNA表達(dá)，但程度較弱。模型組大鼠12周肝

11、組織LBP mRNA表達(dá)明顯上調(diào)，與正常組比較差異有顯著意義。中劑量治療組大鼠肝組織LBPmRNA表達(dá)較模型組明顯下調(diào)，有顯著性差異。低劑量治療組、陽(yáng)性對(duì)照組和預(yù)防組大鼠肝組織LBP mRNA表達(dá)比模型組減弱，但無顯著性差異。高劑量治療組大鼠肝組織LBP mRNA表達(dá)與模型組同處于較高水平，兩者差異無顯著意義。正常組大鼠肝組織也有TLR-4 mRNA表達(dá)，但程度較弱。模型組大鼠12周肝組織TLR-4 mRNA表達(dá)明顯上調(diào)，與正常組比較差

12、異有顯著意義。中劑量治療組大鼠肝組織TLR-4 mRNA表達(dá)較模型組明顯下調(diào)，有顯著性差異，但與正常組比較無顯著性差異。其他各組大鼠肝組織TLR-4 mRNA表達(dá)比模型組明顯減弱，有顯著性差異，且與正常組比較也有顯著性差異。 結(jié)論： (1)腸源性內(nèi)毒素血癥可能在非酒精性脂肪性肝炎的發(fā)病中起重要作用。 (2)疏肝祛瘀通絡(luò)降濁法對(duì)非酒精性脂肪性肝炎有療效，作用機(jī)制可能與其降低血清內(nèi)毒素水平和下調(diào)肝組織內(nèi)毒素相關(guān)受體表