福辛普利對非酒精性脂肪性肝炎大鼠纖維化的作用及機制.pdf

1、背景：血管緊張素(Angiotensin，Ang)Ⅱ作為腎素血管緊張素系統(tǒng)(Renin-angiotensin system，RAS)的主要功能組分，扮演著促肝纖維化發(fā)展的角色；血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(Angiotensin-converting enzyme，ACE)是促進AngⅡ生成的關(guān)鍵酶，而ACE2可裂解AngⅡ生成Ang-(1-7)，負向調(diào)節(jié)AngⅡ的作用；AngⅡ可促進瘦素和抑制脂聯(lián)素的生成，而瘦素和脂聯(lián)素分別具有促和抗纖維化的作

2、用。
　　目的：
　　(1)本研究利用高脂飲食誘導(dǎo)非酒精性脂肪性肝炎(Nonalcoholic steatohepatitis，NASH)伴肝纖維化大鼠模型，探討ACE抑制劑福辛普利對肝纖維化的作用。
　　(2)探討福辛普利對NASH伴肝纖維化大鼠ACE2，瘦素和脂聯(lián)素表達的影響。
　　方法：40只雄性SD大鼠，隨機分成4組，每組10只：正常對照組(NC組，普通飲食+生理鹽水1 mL灌胃)、模型組(HC組，高脂飲

3、食+生理鹽水1 mL灌胃)、藥物對照組(NF組，普通飲食+福辛普利3.6 mg/kg/d灌胃)和藥物干預(yù)組(HF組，高脂飲食+福辛普利3.6mg/kg/d灌胃)。24周后處死所有大鼠。
　　(1)測體重和肝濕重，并計算肝濕重/體重比值；
　　(2)肝組織病理學(xué)形態(tài)檢查，分別做HE染色和Masson染色，行非酒精性脂肪性肝病活動度積分(NAFLD activity score，NAS)和肝纖維化分期；
　　(3)檢測肝功

4、，血脂和空腹血糖(fasting blood glucose，F(xiàn)BG)，采用放射免疫法測定血清胰島素濃度，并計算胰島素抵抗指數(shù)；
　　(4)采用酶聯(lián)免疫吸附測定法(Enzyme-linked immuno sorbent assay，ELISA)測定血清ACE2、AngⅡ、Ang-(1-7)、瘦素、脂聯(lián)素、透明質(zhì)酸(Hyaluronic acid，HA)和轉(zhuǎn)化生長因子(Transforming growth factor，TGF)

5、-β1濃度；
　　(5)RT-PCR檢測肝組織中ACE2、瘦素和脂聯(lián)素mRNA轉(zhuǎn)錄水平以及白色脂肪組織中的瘦素和脂聯(lián)素mRNA轉(zhuǎn)錄水平；
　　(6)Western blotting檢測肝組織ACE2、膠原蛋白Ⅰ和α-平滑肌動蛋白(α-SMA)蛋白的表達。
　　結(jié)果：
　　(1)與HC組比較，HF組大鼠肝濕重(32.61±8.65 vs 23.42±4.28，P<0.05)和肝濕重/體重比值(0.050±0.004

6、 vs 0.042±0.004，P<0.05)顯著降低，體重變化無顯著差異(643.60±134.34 vs 553.00±63.41，P>0.05)。
　　(2)與HC組比較，HF組大鼠肝細胞脂肪變性(2.85±0.24 vs 1.40±0.52)、炎癥浸潤(2.25±0.64 vs 1.20±0.26)、NAS(5.85±1.31 vs 3.00±0.82)和纖維化分期(3.80±0.75 vs 2.05±0.60)評分顯著降

7、低，P值均小于0.05，氣球樣變差異無顯著性(0.75±0.59 vs 0.40±0.39，P>0.05)。
　　(3)與HC組比較，HF組大鼠血清ALT(91.30±30.71 vs 50.20±12.13)、ALP(243.00±77.23 vs 161.30±37.16)、TG(2.25±0.31 vs 1.09±0.34)、TCHO(3.12±0.50 vs 2.48±0.36)、LDL(1.53±0.31 vs 1.16

8、±0.13)、FFA(0.96±0.06 vs 0.56±0.13)、胰島素水平(21.62±5.78 vs 14.13±3.26)和胰島素抵抗指數(shù)(11.29±3.67 vs 5.77±1.76)顯著降低，P值均小于0.05；而GGT、TBA和FBG變化無顯著差異，P值均大于0.05。
　　(4)HC組大鼠血清中ACE2、AngⅡ和Ang-(1-7)的水平均明顯高于NC組，P值均小于0.05；與HC組比較，HF組大鼠血清AngⅡ

9、(0.39±0.10 vs0.12±0.13)的水平顯著降低，血清ACE2(12.15±4.83 vs 22.65±5.65)和Ang-(1-7)(0.67±0.18 vs 1.58±72)水平顯著升高，P值均小于0.05。
　　(5)與NC組比較，HC組大鼠血清瘦素和瘦素/脂聯(lián)素比值(L/A)比值顯著升高(P<0.05)，而脂聯(lián)素水平顯著降低(P<0.05)；與HC組比較，HF組大鼠血清瘦素水平(130.61±35.56 vs

10、31.74±36.35)和L/A(25.07±13.41 vs 1.67±2.07)顯著降低，脂聯(lián)素水平(5.97±2.19 vs 21.60±8.43)顯著升高，P值均小于0.05。
　　(6)HC組大鼠血清HA和TGF-β1顯著高于NC組，P值均小于0.05；與HC組比較，HF組大鼠血清HA(165.72±29.13 vs 90.13±27.42)和TGF-β1(125.95±8.23 vs 72.55±23.25)水平顯著降

11、低，P值均小于0.05。
　　(7)RT-PCR檢測，HC組大鼠肝組織ACE2 mRNA表達顯著高于NC組(P<0.05)；與HC組比較，HF組大鼠肝組織ACE2 mRNA表達水平顯著升高(P<0.05)。
　　(8)與NC組比較，HC組肝組織瘦素mRNA表達水平顯著升高，脂聯(lián)素表達水平顯著降低，P值均小于0.05；與HC紐比較，HF組大鼠肝組織瘦素mRNA表達水平顯著降低，脂聯(lián)素mRNA表達水平顯著升高，P值均小于0.05

12、。
　　(9)與NC組比較，HC組白色脂肪組織瘦素mRNA表達水平顯著升高，脂聯(lián)素表達水平顯著降低，P值均小于0.05；與HC組比較，HF組大鼠白色脂肪組織脂聯(lián)素mRNA表達水平顯著升高(P<0.05)，瘦素表達差異無顯著意義(P>0.05)。
　　(10)Western blotting檢測，與NC組比較，HC組大鼠肝組織ACE2、膠原蛋白Ⅰ和α-SMA蛋白表達水平都顯著升高，P值均小于0.05；與HC組比較，HF組大鼠肝

13、組織ACE2蛋白的表達水平顯著升高，膠原蛋白Ⅰ和α-SMA蛋白表達水平顯著降低，P值均小于0.05。
　　結(jié)論：
　　(1)本研究通過高脂飲食，成功構(gòu)建NASH伴肝纖維化的大鼠模型。
　　(2)福辛普利可顯著改善NASH大鼠胰島素抵抗、肝脂肪變性和肝纖維化。
　　(3)福辛普利可升高NASH大鼠肝ACE2的表達。福辛普利可能通過增加NASH大鼠血清和肝ACE2的表達，降低AngⅡ的生成，進一步下調(diào)瘦素和上調(diào)脂聯(lián)素