Kupffer細(xì)胞在非酒精性脂肪性肝炎發(fā)病中的作用.pdf

1、研究目的:1.通過(guò)高脂飲食建立大鼠非酒精性脂肪性肝炎(NASH)肝纖維化模型.2.觀察大鼠NASH形成過(guò)程中Kupffer細(xì)胞活性的變化,以及NASH大鼠對(duì)內(nèi)毒素敏感性的改變,明確NASH時(shí)Kupffer細(xì)胞功能的改變.3.探討NASH大鼠Kupffer細(xì)胞功能改變的機(jī)制,包括腸道環(huán)境的變化、腸源性?xún)?nèi)毒素血癥,以及游離脂肪酸、極低密度脂蛋白(VLDL)的作用等方面.研究方法:1.以普通飼料+2％膽固醇+10％豬油組成的高脂飼料喂養(yǎng)雄性S

2、D大鼠,在實(shí)驗(yàn)4、8、12、16和24周分批處死.測(cè)定體重、肝臟濕重、血脂和血清轉(zhuǎn)氨酶.通過(guò)HE染色和VG苦味酸染色觀察肝臟肝細(xì)胞脂肪變性、炎癥和纖維化程度.通過(guò)免疫組化了解肝臟Ⅲ型膠原、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(TGFβ1)、α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-SMA)表達(dá).2.在不同實(shí)驗(yàn)階段,免疫組化染色法動(dòng)態(tài)觀察高脂飲食模型大鼠肝臟溶菌酶和內(nèi)毒素結(jié)合受體CD14抗原表達(dá),RT-PCR法觀察肝臟內(nèi)毒素信號(hào)受體TLR4 mRNA和細(xì)胞因子TNF-α mR

3、NA表達(dá),ELISA法測(cè)定血清細(xì)胞因子TNF-α、IL-1β和IL-6水平.3.實(shí)驗(yàn)24周,高脂飲食模型大鼠腹腔內(nèi)注射小劑量的內(nèi)毒素(0.5mg/kg)后觀察24小時(shí)生存率,測(cè)定血脂、血糖、血清轉(zhuǎn)氨酶,血清TNF-α、IL-1β、IL-6水平,肝組織行HE染色和VG染色觀察肝臟病理.4.在實(shí)驗(yàn)不同階段,鱟試劑偶氮顯色法測(cè)定高脂飲食模型大鼠外周血和門(mén)靜脈血血清內(nèi)毒素水平.乳果糖組大鼠高脂飲食8周后口服乳果糖水溶液,16周處死,觀察體重、肝