一次性唾液α-淀粉酶生物傳感器的研制.pdf

1、目的： 隨著社會(huì)的快速發(fā)展和競(jìng)爭(zhēng)的日益加劇，輕度的精神疾病如抑郁癥、孤獨(dú)癥、焦慮癥等心理障礙像感冒一樣普遍。當(dāng)人精神壓力增大時(shí)，唾液中的α-淀粉酶活性急劇升高。通過(guò)檢測(cè)唾液中的α-淀粉酶活性可了解人的精神壓力狀況。 1.制備一次性絲網(wǎng)印刷電極，制備的電極具有重復(fù)性好，穩(wěn)定，干擾因素小等特點(diǎn)；2.通過(guò)Nafion把二茂鐵固定在基于絲網(wǎng)印刷技術(shù)制備的一次性碳電極表面，用戊二醛、明膠將α-糖苷酶和葡萄糖氧化酶間接交聯(lián)修飾到電極

2、上，制備雙酶修飾的一次性唾液α-淀粉酶生物傳感器。生物傳感器能對(duì)唾液α-淀粉酶活性進(jìn)行快速、定量、準(zhǔn)確的檢測(cè)。這為建立一種精神壓力檢測(cè)新方法奠定基礎(chǔ)。 方法： （1）在0.2mm厚的PVC薄膜上分別印刷導(dǎo)電銀膜，PVC油墨絕緣膜。PVC一端作為接線端，另一端用碳漿印刷直徑為3mm的圓盤(pán)作為碳工作電極。制備好的絲網(wǎng)印刷工作電極在含氯化鉀的鐵氰化鉀氧化還原對(duì)（[Fe（CN）6]3-/[Fe（CN）6]4-）溶液中進(jìn)行循環(huán)伏安

3、分析，分析工作電極的電化學(xué)性能。 （2）用戊二醛、明膠將α-糖苷酶和葡萄糖氧化酶間接交聯(lián)修飾的一次性唾液α-淀粉酶生物傳感器作為工作電極，鉑絲作為對(duì)電極，飽和甘汞電極作為參比電極進(jìn)行循環(huán)伏安法（CV）掃描，了解傳感器的工作電位；計(jì)時(shí)電流法（CM）檢測(cè)唾液α-amylase的活性。α-淀粉酶加入淀粉底物溶液中準(zhǔn)確反應(yīng)5 min，記錄加入α-淀粉酶后二茂鐵氧化峰電流的增值，根據(jù)二茂鐵氧化峰電流的增值與加入α-淀粉酶的量成正比進(jìn)行定量

4、分析。 （3）用回收實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)一次性唾液α-淀粉酶生物傳感器檢測(cè)α-淀粉酶活性的準(zhǔn)確度、重復(fù)性。 結(jié)果： （1）制備的絲網(wǎng)印刷電極成本低、重復(fù)性好、集成化和便于批量生產(chǎn)。 （2）用Nafion固定二茂鐵（Fc）作為電子介體，通過(guò)間接交聯(lián)法將α-糖苷酶和葡萄糖氧化酶（GOD）固定于二茂鐵修飾的電極上，制成一次性唾液α-淀粉酶生物傳感器。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明在最佳反應(yīng)條件下，該傳感器響應(yīng)電流與α-淀粉酶活性在60.0～

5、840.0 U/L之間呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，檢出限為17.0 U/L。該生物傳感器達(dá)到95％穩(wěn)態(tài)響應(yīng)時(shí)間不超過(guò)30 s，具有良好的一致性、準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性。 結(jié)論： 本研究用Nafion固定二茂鐵（Fc）作為電子介體，通過(guò)間接交聯(lián)法將α-糖苷酶和葡萄糖氧化酶（GOD）固定于二茂鐵修飾的電極上，成功制備了一次性唾液α-淀粉酶生物傳感器。同一支生物傳感器對(duì)含300U/Lα-淀粉酶的淀粉磷酸鹽緩沖溶液（20 g/L，pH7.0）重