華貴櫛孔扇貝視黃素受體基因克隆及表達(dá)研究.pdf

1、華貴櫛孔扇貝(Chlamys nobilis)因其貝殼色彩絢麗、營養(yǎng)豐富、味道鮮美、生長快、養(yǎng)殖周期短以及經(jīng)濟(jì)效益高等眾多優(yōu)良特性，自上世紀(jì)70年代就已經(jīng)成為我國南方重要的海水養(yǎng)殖貝類。
　　華貴櫛孔扇貝的貝殼顏色通常有橙色、橙紫色和褐色等，其閉殼肌絕大多數(shù)為白色，但本課題組通過多年選育，獲得了一個貝殼和閉殼肌均為金黃色、富含類胡蘿卜素并同時能夠穩(wěn)定遺傳的新品系。目前對于該新品系富集類胡蘿卜素的機(jī)制、類胡蘿卜素的代謝以及代謝調(diào)控的

2、機(jī)制等問題目前尚未明確。
　　視黃素受體(Retinoid Receptor)，包括視黃酸受體(Retinotic Acid Receptor, RAR)和視黃素X受體(Retinoid X Receptor, RXR)，其功能主要包括調(diào)節(jié)多條代謝途徑，參與早期胚胎發(fā)育、性腺發(fā)育和生殖過程等。近年來在脊椎動物中的研究發(fā)現(xiàn)其在類胡蘿卜素的代謝中具有調(diào)控作用。
　　本文首次在華貴櫛孔扇貝克隆得到 RAR和RXR基因其部分亞型的c

3、DNA全長，并進(jìn)行了同源性分析、組織表達(dá)差異分析及其與類胡蘿卜素含量關(guān)系的研究。主要結(jié)果如下：
　　1、RAR和RXR基因全長cDNA序列的克隆。結(jié)合同源克隆與RACE-PCR方法，克隆得到華貴櫛孔扇RAR(CnRAR)和RXR(CnRXR)基因的全長cDNA序列并發(fā)現(xiàn)了其中部分亞型。RAR基因包括，CnRARa全長1958 bp(不包括Ploy A尾，下同)編碼434個氨基酸殘基；CnRARb全長1901 bp，較CnRARa少

4、編碼19個氨基酸。RXR基因包括，CnRXRa全長5480 bp，編碼450個氨基酸殘基；CnRXRb較CnRXRa缺失12個堿基；CnRXRc為CnRXRa的剪接亞型，全長4728 bp，共編碼436個氨基酸殘基；CnRXRd較CnRXRc缺失12個堿基。核定位信號預(yù)測發(fā)現(xiàn)華貴櫛孔扇貝RARs和RXRs均定位于細(xì)胞核。取多個物種的視黃素基因做同源分析發(fā)現(xiàn)，華貴櫛孔扇貝RAR蛋白先與同為雙殼綱的太平洋牡蠣聚成一支，之后與其他貝類匯為一支

5、，然后與脊索動物聚類。華貴櫛孔扇貝 RXR蛋白先與同屬扇貝科的櫛孔扇貝親緣關(guān)系最近，之后與其他貝類聚為一支，然后與脊索動物聚類，但與甲殼綱和昆蟲綱進(jìn)化距離較遠(yuǎn)。
　　2、RAR和RXR組織差異表達(dá)。采用實時熒光定量PCR技術(shù)檢測華貴櫛孔扇貝 RAR和RXR mRNA在不同組織中的表達(dá)特性。結(jié)果顯示，CnRARs和CnRXRs廣泛表達(dá)于各組織中，但具有一定的組織表達(dá)特異性，CnRARs在性腺中的表達(dá)量顯著高于其他組織，在閉殼肌組織中

6、次之。而 CnRXRs則在血液中大量表達(dá)，其次為閉殼肌。
　　3、RAR和RXR與類胡蘿卜素含量關(guān)系。通過對扇貝體內(nèi)的一個重要的類胡蘿卜素吸收相關(guān)基因(清道夫受體蛋白樣基因, SRB-like-3)進(jìn)行RNA干擾，研究類胡蘿卜素的變化對視黃素受體基因表達(dá)的影響。結(jié)果表明血液中CnRARs和CnRXRs的表達(dá)量隨干擾處理時間的加長和類胡蘿卜素濃度的降低而迅速上升，說明視黃素受體對類胡蘿卜素濃度變化有較為迅速的響應(yīng)。
　　本研究