從氧化應(yīng)激及CREB信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路探討電針對局灶性腦缺血模型大鼠學(xué)習(xí)記憶的影響.pdf

1、目的:
　　通過研究電針刺激腦缺血模型(MCAO)大鼠，檢測腦組織中氧化應(yīng)激相關(guān)產(chǎn)物及環(huán)磷酸腺苷反應(yīng)元件結(jié)合蛋白(cAMP-response element binding protein, CREB)相關(guān)分子的表達(dá)。探討電針“神庭”、“百會”穴對腦缺血后大鼠學(xué)習(xí)記憶的影響，闡明電針治療腦缺血后認(rèn)知功能障礙的可能機制。
　　方法:
　　將雄性Sprague-Dawley大鼠96只，隨機分為假手術(shù)組、模型組、電針組、非穴

2、組，每組24只大鼠。以大腦中動脈閉塞(MCAO)法建立大鼠局灶性腦缺血模型。電針組和非穴組大鼠于腦缺血24h后開始干預(yù)，電針組參考《常用動物腧穴圖譜》取大鼠神庭和百會穴，非穴組取在腹部兩脅處，兩組均應(yīng)用電針刺激，采用疏密波，頻率1-20Hz，30min/次，1次/日，行電針干預(yù)7天;假手術(shù)組及模型組以同樣方法固定30min，但不進(jìn)行電針刺激。各組在造模后第3天開始采用Morris水迷宮檢測大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力;在造模后2小時采用Zea l

3、onga神經(jīng)行為學(xué)評分方法觀察大鼠肢體運動功能障礙的改變情況;七天后處死大鼠取材，用TTC染色法檢測腦梗死體積;運用免疫組化方法觀察腦缺血周圍活化型半胱天冬酶-3(cleaved Caspase-3)的表達(dá)強度;應(yīng)用蛋白免疫印跡法(Western Blot)檢測腦組織中CREB及凋亡相關(guān)因子蛋白的表達(dá)情況;用化學(xué)比色法檢測氧化應(yīng)激相關(guān)產(chǎn)物超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)的表達(dá)情況。
　

4、　結(jié)果:
　　(1)經(jīng)電針干預(yù)7天后，電針組的神經(jīng)行為學(xué)缺損評分與模型組、非穴組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01);
　　(2)在定向航行試驗的4天中:結(jié)果提示電針治療可以降低MCAO大鼠的平均逃避潛伏期，與非穴組、模型組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01);第7天的空間探索試驗結(jié)果顯示:與假手術(shù)組（3.58±0.93）相比，模型組（0.71±0.14）、非穴組（0.83±0.21）穿越平臺的次數(shù)明顯減少，差異有統(tǒng)計學(xué)意義

5、(P＜0.01);電針組大鼠穿過平臺次數(shù)（1.58±0.42）與模型組、非穴組相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。
　　(3)7天后取腦組織行TTC染色法:與假手術(shù)組相比較，模型組、非穴組腦梗面積顯著增加，兩者差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01）;電針組的腦梗體積比率下降，與模型組相比較有統(tǒng)計意義(P＜0.05）;非穴組的腦梗體積與電針組相比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　(4)腦組織氧化應(yīng)激結(jié)果顯示:與假手術(shù)組相

6、比較，模型組、非穴組MDA含量顯著增加，兩者差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）;電針組可明顯降低MDA的含量，與模型組、非穴組相比較差異有統(tǒng)計意義(P＜0.05);與假手術(shù)組相比較，模型組、非穴組SOD、GSH-PX含量降低，兩者差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01);電針組可增加SOD、GSH-PX的含量，與模型組、非穴組相比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05）。
　　(5)蛋白免疫印跡結(jié)果顯示:與假手術(shù)組比較，模型組及非穴組大鼠p-CR

7、EB和Bcl-2表達(dá)降低(P＜0.01)，cleaved Caspase-3和Bax蛋白的表達(dá)升高(P＜0.01)，提示腦缺血損傷促進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞的凋亡。電針治療可促進(jìn)p-CREB和Bcl-2的表達(dá)，抑制cleaved Caspase-3和Bax的表達(dá)，從而發(fā)揮其抗凋亡的神經(jīng)保護(hù)作用。
　　結(jié)論:
　　電針“神庭”、“百會”穴可通過抑制氧化應(yīng)激及促進(jìn)CREB信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路上相關(guān)分子的表達(dá)從而抑制神經(jīng)細(xì)胞的凋亡，起到神經(jīng)保護(hù)作用，這