運用QD-FLISA法定量檢測轉基因玉米中的Cry1Ab蛋白.pdf

1、目前，酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)、試紙條技術(latefal flow strip)和蛋白免疫印記法( Western blot)等能夠從蛋白質水平快速、高效地檢測轉基因食品。本論文研究了一種納米熒光材料-量子點(QDs)標記抗體(IgG)的最佳連接條件，及通過熒光分光光度計對連接效果進行鑒定。并利用轉基因玉米中殺蟲劑蛋白(純Cry1Ab蛋白)免疫大白兔，成功研制出抗Cry1Ab蛋白多克隆抗體。運用ELISA原理建立了QD-FLISA

2、檢測方法，并在檢測轉基因食品方面得到初步應用。具體內容如下： 本實驗首先從蘇云金芽孢桿菌(Bacillus thuringiensis)HD-1菌株中提取得到Cry1Ab蛋白，運用Bradford法測得蛋白濃度為2mg/mL。利用Cry1Ab蛋白質與等量的佐劑充分乳化后采用背部皮下免疫大白兔(3kg/只)，采用間接ELISA法進行抗體效價測定。 然后通過反復試驗，最終成功地將量子點標記上抗體，確定其最佳溶液配比是：25μ

3、L量子點母液(Img/mL)，20μL EDC溶液(10mg/mL)，10μL NHS溶液(1.5mg/mL，pH7.0)和0.2mg Abs(羊抗兔抗體)在室溫下反應4h，并采用離心過濾技術，對量子點標記抗體的混合物分離純化。 最后建立了QD-FLISA法并優(yōu)化反應體系，確定鼠抗Cry1Ab單克隆抗體(McAb)最佳工作濃度為10μg/mL、兔抗Cry1Ab多克隆抗體(PcAb)和QDs標記羊抗兔IgG分別按1:1000和1:

4、500稀釋時效果最好。QD-FLISA法檢測結果是：該方法能特異地檢測Cry1Ab蛋白，與其它蛋白類似物Cry2Ab、Cry1F和Cry3Bb無交叉反應。轉基因玉米MON810的線性定量范圍是0.05-5％，測得LOD(limit of detection)和LOQ(limit ofquantification)值分別是2.956pg/mL和9.854pg/mL。相比常規(guī)夾心ELISA定量檢測轉基因玉米，它的靈敏度更高，并且具有高準確度