細胞重編程技術和移植治療視神經損傷的實驗研究.pdf

1、本文主要從以下幾個部分展開論述：
　　第一部分 重編程人成纖維細胞成為視網膜視神經節(jié)細胞的研究
　　目的:①在重編程獲取來源于病人成纖維細胞誘導型視網膜視神經節(jié)細胞(hiRGC細胞);②研究這些細胞的生物學特征。
　　方法:①篩選與RGC發(fā)育、分化相關的誘導因子;②構建攜帶有轉錄因子的表達載體;③收集、培養(yǎng)病人頭皮成纖維細胞;④載體轉染和產生人誘導型視網膜視神經節(jié)細胞細胞;⑤hiRGC細胞的生物學特性鑒定;⑥hiRGC

2、細胞的神經電生理特征。
　　結果:以標準流程培養(yǎng)出病人的頭皮成纖維細胞，通過轉染含有Mash1，Math5和RAX基因的慢病毒表達載體，獲得了hiRGC細胞，該細胞具有神經元形態(tài)和生理特征;經細胞免疫組織化學鑒定和電生理檢測，證明該hiRGC具有與正常神經元相似的生物學和生理學特征。
　　結論:使用Mash1，Math5和RAX三個基因可將成人成纖維細胞直接轉變成為具有神經元細胞特征的人誘導型視網膜視神經節(jié)細胞。
　　

3、第二部分 視網膜視神經節(jié)細胞移植玻璃體治療視神經損傷的效果研究
　　目的:檢測誘導型視網膜視神經節(jié)細胞在移植進動物視網膜內后的生物學行為、特征和功能，為證明該類細胞在體內具有生理功能提供證據。
　　方法:①流式細胞術篩選hiRGC細胞;②制作裸小鼠視神經損傷模型;③將hiRGC移植進入免疫缺陷鼠視網膜內。③檢測hiRGC細胞在宿主眼內的生理、生化特性;④評價hiRGC細胞移植對于裸小鼠視神經功能恢復的影響情況。
　　結