成年豚鼠新皮質(zhì)淺層神經(jīng)球培養(yǎng).pdf

1、目的：分析成年豚鼠新皮質(zhì)淺層細(xì)胞體外增殖和分化潛能，探討新皮質(zhì)淺層存在成年神經(jīng)發(fā)生的可能性。
　　方法：分離不同年齡段豚鼠不同部位腦組織，包括新皮質(zhì)淺層、深層以及海馬腦組織，體外懸浮培養(yǎng)、擴(kuò)增及傳代，比較不同年齡、不同部位組織來源的神經(jīng)球樣細(xì)胞簇形成率的差異;用Nestin免疫熒光染色進(jìn)一步檢測成年豚鼠皮質(zhì)淺層分離出的細(xì)胞是否具有神經(jīng)干/祖細(xì)胞的特性;去除生長因子后，用胎牛血清和NGF誘導(dǎo)成年豚鼠新皮質(zhì)淺層神經(jīng)干/祖細(xì)胞進(jìn)行分化，

2、通過免疫熒光染色檢測神經(jīng)元標(biāo)記物MAP-2、β-Ⅲ Tubulin和星形膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)記物GFAP的表達(dá);并應(yīng)用膜片鉗技術(shù)對(duì)誘導(dǎo)分化后神經(jīng)元的電生理功能進(jìn)行檢測。
　　結(jié)果：所取的豚鼠腦組織細(xì)胞在體外可以形成集落樣生長的神經(jīng)球，幾乎整個(gè)神經(jīng)球均由Nestin陽性細(xì)胞組成，部分神經(jīng)球細(xì)胞共表達(dá)GFAP。誘導(dǎo)分化后的細(xì)胞顯示不同比例的神經(jīng)元標(biāo)記物MAP-2、β-Ⅲ Tubulin和星形膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)記物GFAP染色陽性。膜片鉗檢測可見誘導(dǎo)分化