雷公藤甲素對急性肺損傷大鼠肺內ABCA1表達的影響.pdf

1、第一部分 LPS誘導大鼠急性肺損傷動物模型的建立
　　目的：評估脂多糖(Lipopolysaccharide, LPS)誘導的大鼠急性肺損傷動物模型可靠性。
　　方法：30只雄性SD大鼠，體重200~250g，隨機分為2組：對照組(C組，n=15)；模型組(M組，n=15)。C組和 M組分別經尾靜脈注射同等容量的生理鹽水或 LPS5mg/kg。各組分別于建模前1h和建模后3、6、12h抽取動脈血氣；建模后12h處死大鼠，留取

2、右肺下葉，石蠟切片，HE染色，光鏡下觀察肺組織病理改變；計算大鼠右肺中葉濕/干重(W/D)比。
　　結果：肺臟病理形態(tài)學觀察和常規(guī)光鏡檢查：肺臟大體觀察示C組大鼠肺組織形態(tài)大小正常，呈粉紅色，表面光滑，切面可見組織細膩，無滲出、充血等明顯異常改變。M組肺體積明顯增大，肺表面色澤暗紅，可見包膜下散在出血點、出血斑及斑片狀略凹陷的肺萎陷區(qū)，切面疏松，有黃色或淡紅色液體溢出。HE染色后，C組光鏡下肺組織結構完整，肺泡結構清晰，肺泡腔完整

3、,壁光滑,肺泡間隔均勻一致,可見少量白細胞,肺泡腔中無滲出液或滲出的白細胞；M組大鼠光鏡下大量炎性細胞浸潤，毛細血管明顯擴張、充血，白細胞附壁，肺泡隔明顯增寬，肺泡壁完整結構破壞，肺泡壁斷裂，部分肺泡內見出血及微血栓形成，大量白細胞滲出、聚集,肺泡腔中可見滲出液、紅細胞、多形核中性粒細胞、巨噬細胞，部分肺泡腔萎陷不張。與C組相比，M組肺毛細血管充血、中性粒細胞滲出及肺泡間隔增寬程度明顯加劇(P<0.05)，且M組右肺中葉W/D比值明顯增

4、加(P<0.05)。在動脈血氧分壓(PaO2)變化上，M組PaO2隨時間延長下降明顯。與C組同時間段相比，M組建模后3、6、12h PaO2均下降明顯(P<0.05)；與同組基礎值相比，M組建模后12h PaO2下降46.01%。與C組相比。M組大鼠肺部病理改變，PaO2下降符合急性肺損傷動物模型標準。從病理角度看M組有80.0%的大鼠出現(xiàn)肺損傷變化，而C組只有20%的大鼠出現(xiàn)一定的病理變化。
　　結論：以LPS5mg/kg尾靜脈

5、注射可成功建立大鼠急性肺損傷模型。
　　第二部分雷公藤甲素對急性肺損傷大鼠肺內ABCA1表達的影響
　　目的：探討急性肺損傷大鼠肺內 ABCA1(ATP-binding cassette transporter A1)基因、蛋白的表達及意義；以及雷公藤甲素對急性肺損傷大鼠肺內ABCA1基因、蛋白表達調節(jié)的影響，以探討其肺保護作用的可能機制。
　　方法：30只雄性SD大鼠，體重200~250g，隨機分為6組：①正常組(N

6、組，n=5)，不作任何處理；②對照組(C組，n=5)，經尾靜脈注射生理鹽水，同時腹腔注射1%二甲基亞砜(DMSO)；③LPS組(L組，n=5)，經尾靜脈注射LPS5mg/kg，同時腹腔注射1%DMSO；④雷公藤甲素25μg組(TP1組，n=5)，經尾靜脈注射LPS5mg/kg，同時腹腔注射雷公藤甲素25μg/kg；⑤雷公藤甲素50μg組(TP2組，n=5)，經尾靜脈注射LPS5mg/kg，同時腹腔注射雷公藤甲素50μg/kg；⑥雷公藤甲

7、素100μg組(TP3組， n=5)，經尾靜脈注射LPS5mg/kg，同時腹腔注射雷公藤甲素100μg/kg。觀察12 h后處死大鼠，取新鮮肺組織，用熒光定量PCR測定ABCA1mRNA的表達；應用western blot分析ABCA1蛋白表達。用ELISA法檢測血清、左肺肺泡灌洗液TNF-α水平；留取右肺下葉，石蠟切片，HE染色，光鏡下觀察肺組織病理，按照改良彌漫性肺泡損傷(improved evaluation of diffuse

8、 alveolar damage score，IDAD)標準進行評分；測量大鼠右肺中葉W/D；各組于注射前1h和注射后1、3、6、12h抽取動脈血行血氣分析。
　　結果：1、各組大鼠肺病理改變、IDAD評分及W/D比值：N、C組大鼠光鏡下肺組織結構正常, IDAD評分及W/D比值，兩組間比較無統(tǒng)計學差異(P<0.05)； L組大鼠可見肺泡間隔明顯增寬、肺泡陷閉、肺泡腔內滲出等，與N、C組比較，IDAD評分及W/D比值均升高且有統(tǒng)計

9、學意義(P<0.05)；TP1組大鼠亦可見肺泡間隔增寬、肺泡陷閉、肺泡腔內滲出等， IDAD評分、右肺中葉W/D比值高于N、C組有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，與L組相比無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；TP2組肺泡結構基本正常，間質有水腫，部分可見毛細血管擴張、充血和炎性細胞浸潤，IDAD評分雖高于N、C組(P<0.05)，但較L組明顯改善(P<0.05)，右肺中葉W/D比值亦小于L組(P<0.05)；TP3組可見肺泡間隔稍增寬、部分肺泡陷

10、閉、間質有水腫、部分可見毛細血管擴張、充血和炎性細胞浸潤等，但IDAD評分、右肺中葉W/D比值均低于L組(P<0.05)，與TP2組相比，無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。
　　2、動脈血氣分析：L組、TP1組注射后3、6、PaO2下降，且與N、C組相比有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；TP2組、TP3組注射后3、6、12h PaO2亦下降，與N、C組相比有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，但較L組、TP各組同時間段PaO2高且有統(tǒng)計學意義(P

11、<0.05)。
　　3、血清和BALF中TNF-α表達變化：注射后12h血清和BALF中TNF-α表達， L組、TP1組明顯升高且與N、C組相比有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；TP2組、TP3組相應表達均低于L組、TP1組(P<0.05)；但同時TP3組與N、C組相比也降低(P<0.05)；
　　4、ABCA1 mRNA和蛋白表達的變化：TP各組隨著雷公藤甲素劑量的增加，ABCA1 mRNA和ABCA1蛋白的表達呈現(xiàn)升高趨勢，

12、與L組比較，TP2、TP3組ABCA1 mRNA和ABCA1蛋白水平明顯升高(P<0.05)，但TP3組與TP2組相比沒有統(tǒng)計學意義(P>0.05)。
　　結論：
　　1、LPS致急性肺損傷大鼠肺內ABCA1基因、蛋白表達較對照組減少。
　　2、雷公藤甲素能降低LPS致急性肺損傷大鼠炎性因子表達，改善氧合，減輕肺的病理損害，發(fā)揮肺保護作用。
　　3、雷公藤甲素能促進 ABCA1基因、蛋白表達，抑制炎癥因子的分泌。