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牙周牙髓聯(lián)合病變細菌的PCR-DGGE分析.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:牙周炎和牙髓根尖周病的發(fā)病因素和病理過程雖不完全相同,但牙周袋內和感染牙髓內都存在以厭氧菌為主的混合感染,它們所引起的炎癥和免疫反應有許多相似之處,二者的感染和病變可以相互擴散和影響,導致牙周牙髓聯(lián)合病變的發(fā)生。關于牙周炎和牙髓根尖周病作為獨立的病變形態(tài)的細菌學研究,數(shù)量很多,涉及方面亦很廣泛。而介于二者“交叉地帶”的牙周牙髓聯(lián)合病變的細菌學研究要相對的少一些,而且這些研究多以傳統(tǒng)的細菌培養(yǎng)為基本手段,對已知細菌進行檢測和相關研究

2、,對于未能人工培養(yǎng)的細菌和未知菌的關注很少,而相關研究表明,口腔中不能被培養(yǎng)出來的微生物種類和數(shù)量遠遠高于能夠培養(yǎng)的微生物,因此我們可以認為之前以培養(yǎng)為研究手段的研究結果,并不能了解牙髓炎和根尖周炎微生物群體的全貌?,F(xiàn)代微生物技術中的變性梯度凝膠技術(DenaturingGradientGelElectrophoresis,DGGE)可比較直觀的呈現(xiàn)某種環(huán)境中微生物的群落情況與變化,并獲取不可培養(yǎng)細菌和未知菌的基因組資源,為進一步深入了

3、解牙周牙髓聯(lián)合病變的微生物種群全貌提供了新的手段。
   本文利用變性梯度凝膠電泳技術觀察牙周牙髓聯(lián)合病變患牙牙周組織和根管中原始菌群分布狀況及其異同,并通過克隆測序技術來試圖探討兩部位可能存在的優(yōu)勢菌,為該病變的進一步研究奠定一定的細菌學基礎。
   方法:
   1、牙周牙髓聯(lián)合病變菌群結構的研究
   從13例牙周牙髓聯(lián)合病變患牙分別采集患牙根尖1/3處牙周細菌和根管牙髓細菌,提取細菌總DNA,以其

4、為模板擴增16SrRNA基因可變區(qū),再進行變性梯度凝膠電泳,觀察菌種條帶分布情況。用QuantityOne軟件對DGGE圖譜進行相似系數(shù)(DiceCoefficient)計算和聚類分析。應用SPSS17.0統(tǒng)計軟件對實驗數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學分析。
   2、牙周牙髓聯(lián)合病變具體菌種的研究
   對DGGE凝膠中有代表性的條帶進行切膠回收,隨后克隆測序,通過BLAST序列比對,了解某些條帶對應的細菌菌種。
   結果:<

5、br>   1、13例樣本的DGGE圖譜條帶數(shù)的配對t檢驗結果顯示牙周、牙髓樣本的菌種條帶數(shù)之間有明顯的統(tǒng)計學差異(p<0.01)。Spearman等級相關分析顯示二者之間無正相關性。同牙的牙周、牙髓菌種條帶相似系數(shù)(DiceCoefficient)為13.1%-62.5%不等。
   2、DGGE凝膠條帶回收克隆測序BLAST(≧98%序列相似度)的結果顯示:牙周牙髓聯(lián)合病變患牙根尖區(qū)1/3處牙周菌種可能有Campyloba

6、cter,Fusobacterium,Neisseria,Peptostreptococcus,Veillonella,Aggregatibacter,Enterobacter,Haemophilus等,該處對應根管中菌種可能有Mogibacterium,Corynebacterium,Neisseria,Actinomyces等。約50%測序序列BLAST結果序列相似度<95%。
   結論:
   1、牙周牙髓聯(lián)合病

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