PCR-DGGE和RT-PCR技術(shù)在赤潮藻檢測(cè)中的應(yīng)用.pdf

1、赤潮也稱紅潮，通常是指由于一些海洋浮游生物在水體中過度繁殖或聚集而使海水變色的現(xiàn)象。赤潮特別是有害赤潮造成了嚴(yán)重的生態(tài)環(huán)境問題，給水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)和濱海旅游業(yè)造成了巨大損失，并可直接危害人類健康。研究赤潮，進(jìn)而預(yù)防和控制赤潮，首先要對(duì)引發(fā)赤潮的生物種類進(jìn)行準(zhǔn)確鑒定并對(duì)自然水域的赤潮生物進(jìn)行監(jiān)控，并建立赤潮藻的快速定性與定量檢測(cè)方法。本研究以共生甲藻，赤潮異灣藻，海洋原甲藻為材料，結(jié)合PCR-DGGE(聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)－變性梯度凝膠電泳)方法與R

2、T-PCR(實(shí)時(shí)熒光定量)方法進(jìn)行定性定量研究。
　　 根據(jù)共生甲藻，赤潮異灣藻，海洋原甲藻核糖體基因的18S rDNA部分序列設(shè)計(jì)了一對(duì)通用引物，然后優(yōu)化PCR反應(yīng)條件得到擴(kuò)增片段，通過DGGE分析成功的分離了混合藻，得到三種藻的DGGE圖譜，從而證明PCR－DGGE技術(shù)是對(duì)微藻群進(jìn)行鑒定的有效方法。
　　 針對(duì)共生甲藻，赤潮異灣藻，海洋原甲藻核糖體基因的rDNA序列ITS區(qū)分別設(shè)計(jì)了各個(gè)藻種的特異引物，經(jīng)BLASTn