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1、山東農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文馬鈴薯脫毒苗的RTPCR檢測(cè)技術(shù)研究姓名:孫琦申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別:碩士專業(yè):作物遺傳育種指導(dǎo)教師:張春慶2003.6.17越隸嵌娩走掌鞭嚳縫論交馬鈴蔫攔毒苗的litPCR檢舅技術(shù)研究纂蔓毽鈴薯薅毒璃遵彰虢罵鈴裝生產(chǎn)戇重要囂予。解決這一滴題豁:霎妥逡徑就是培養(yǎng)髓鴦姚拳申薯或狩茵,瞧脫毒菌最蠢寵全脫毒囂經(jīng)檢測(cè)才能誠實(shí)。本文主要五究了橙染馬鈴謦的兩種主要瘸攥,即馬鈴簿1『瘸霉(Potatov注撼Y戳幫≥警馬簧萋X瘸簿(Pot
2、ato~irusX,PVX)瞧愛轉(zhuǎn)錄PCR一(RTPCR)檢測(cè)技術(shù)。并將這蝗技術(shù)與方法應(yīng)用于生產(chǎn)祥晶的稔滴:、磷、過本實(shí)驗(yàn),可以銜到瀲下結(jié)論;l。凌避了黔淑攆鬏方法幫茬疆褰露不麓入液蒙粕入氯蘩采掇鍘RNase的作用。遺~改進(jìn)應(yīng)掰予“一步法”每“CTAB法”并獲得了殘功。2鵝改遴的“CTAB法”成功鮑提取丁馬鈴驀塊莖巾的RNA,這種方法譽(yù)餐去多耱魄狡褥交囂盛節(jié)謄戎本,攮露薄荸。3對(duì)騖鈴薯X瘸毒靜jE隸分離物與福遞分離揍的蕊嗣拳剄進(jìn)囂魄較楚
3、箕夕殼蛋嬲旗因序列的嗣源區(qū)設(shè)計(jì)一對(duì)引物,建立了馬鈴薯X稽毒魏艇’PCR撿灝薅搴。4對(duì)馬鈴薯¥瘸毒黲兩個(gè)攘系,N轅累(PVY“)與O株系(PVY%的旗豳序列進(jìn)行比較,在箕外凇蚤白睜歹U閽源區(qū)設(shè)計(jì)~對(duì)Sf翰,建立了pVy“與w≯’邋躐黲PV¥薅薅RTPCR鹼測(cè)俗夏。5?!贻^馬鈴鬻Y病毒的N株系與。株系的基因序硎,雀筒源匿的~處設(shè)計(jì)一條3’引搦,在葵上游的差舜醒兩鏈~個(gè)依據(jù)N株系。另一個(gè)議撂。撩系分弱設(shè)i中了磋釜5‘差器引戇,建立了霹臻意馬鈴
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