馬鈴薯三種主要病毒的ELISA和RT-PCR檢測技術(shù)的研究.pdf

1、甘肅農(nóng)業(yè)大學碩士學位論文馬鈴薯三種主要病毒的ELISA和RT-PCR檢測技術(shù)的研究姓名：路平申請學位級別：碩士專業(yè)：作物遺傳育種指導教師：王蒂;司懷軍20050601S u m m a r yP o t a t oi sa s t a p l ef o o d c r o pa n d w i d e l y g r o w n i nC h i n a ．V i r u si sa m a i n f a c t o rt h a t

2、a f f e c t st h e p o t a t o p r o d u c t i o n ．P o t a t ov i r u sx ( P V 均，p o t a t o v i r u sY ( P V Y ) ，a n d p o t a t ol e a f r o l lv i r u s ( P L R V ) a r e t o p t h r e e v i r u s e s t h a tr e s u

3、 l ti nd e c r e a s e d y i e l do f p o t a t o i nc h i n a ．T h e r e f o r e ，t h er a p i d m e t h o d s o f E L I S A a n d R T - P C R w e r e s t u d i e d t od e t e c tP V X ，P V Y ，a n d P L R V ．T h e p o t

4、 a t ol e a v e si n f e c t e d w i t h P V X ，P V Y ，a n d P L R V w e r e u s e d a sd o r n o r s ，t h et e c h n i q u e so fv i r u sd e t e c t i n gt h e mb yD A S ·E L I S Aw e r es t u d i e da n da ni n t

5、 e g r a t e dd e t e c t i n gp r o g r a m w e r e e s t a b l i s h e d ．I n t h ee x p e r i m e n t ，t h r e ep a i r so fD N A p r i m e r sw e r ed e s i g n e da n ds y n t h e s i z e db a s e do nt h en u c l e

6、 o t i d es e q u e n c eo f t h ec o a tp r o t e i n ( C P ) g e n eo fP V X ，P V Y ，a n dP L R Vr e s p e c t i v e l y ．T h e v i r u sR N A d i r e c t l y e x t r a c t e d f r o m v i r u s —i n f e c t e d p o t

7、a t ol e a v e sw a s u s e df o re D N A s y n t h e s i s ．“ n l r e es p e c i f i cP C R f r a g m e n t sa b o u t5 3 5 b p ，6 8 0 b a n d 6 2 7b p w e r e o b t a i n e d b y r e v e r s e t r a n s e r i p t i o n

8、a n d p o l y m e r a s e c h a i n r e a c t i o n( R T - P C R ) a m p l i f i c a t i o n ，w h i c hw a s t h ee x p e c t e d l e n g t ho f P V X ，P V Y a n d P L R V C Pg e n e ，w h i l en 0f r a g m e n tw a so b

9、t a i n e df r o mt h ec o n t r o li nt h eS a i T l e e x p e r i m e n t ．T h er e s u l t ss h o w e d t h a ta r a p i d a n d s e n s i t i v eR T - P C R d e t e c t i o n s y s t e m o f P V X ，P V Y a n dP L R V

10、w a se s t a b l i s h e d ，w h i c hc o u l dp r o v i d ea n e f f e c t i v ew a y t od e t e c t t h r e em a i nv i r u s ．’T w os i m p l e ，r a p i d ，s e n s i t i v e ，r e l i a b l ed e t e c t i o nt e c h n i

11、 q u e s o ft h r e ev i r e s o r er e p o r t e di nt h ep a p e r ：t h e ya r eD A S ·E L I S Aa n dR T - P C R ．T h ev i r u sR N A w i t h o u tp u r i f i c a t i o nc o u l db ed e t e c t e dw i t hE L I S A

12、 t e c h n i q u e ，w h i c hi ss i m p l e ra n dr a p i d e rt h a nR T —P C Rt e c h n i q u e ，a n di s m o r es u i t a b l ef o rt h ed e t e c t i o no fag r e a tn u m b e rs a m p l e s ．T h es e n s i t i v i t

13、 y o fE L I S Ai s a s s a m ea s t h a to fR T - P C R ，b u tR T - P C Rt e c h n i q u e i sm o r e s p e c i f i c ．K e y w o r d s ：P o t a t o v i r u s X ．( P V X ) ，P o t a t ov i r u sY ( P V Y ) ，P o t a t o l e

14、 a f r o l lv i r u s ( P L R V ) ，R e v e r s e t r a n s c r i r I t i o n a n d p o l y m e r a s e c h a i n r e a c t i o n ( R T - P C R l ，E n z y m e —l i n k e di m m o l ／L u n o s o r b a n t a s s a y ( E L I