煙草病毒RT-PCR檢測技術(shù)研究.pdf

1、本文研究了RT-PCR檢測TMV、CMV和PVY的技術(shù)方法：用保存在本研究室的TMV、CMV和PVY標(biāo)準(zhǔn)毒原，根據(jù)已經(jīng)發(fā)表的煙草花葉病毒、黃瓜花葉病毒和馬鈴薯Y病毒外殼蛋白基因的序列，人工合成引物，通過分別做TMV、CMV和PVY的單重RT-PCR，在1％瓊脂糖上電泳，分別能擴增出1.44kb、739bp和780bp特異性條帶，通過回收TMV、CMV的PCR產(chǎn)物進行測序和序列分析表明，擴增的TMV條帶的核苷酸序列與已報道的TMV核苷酸序

2、列同源性高達96.6％，擴增的CMV條帶的核苷酸序列與已報道的CMV核苷酸序列同源性高達96％。表明我們所擴增的TMV和CMV條帶是特異性的。 文章進行了CMV、TMV和PVY的多重RT-PCR研究，建立了同時檢測TMV、CMV和PVY的RT-PCR檢測體系，當(dāng)兩種病毒復(fù)合侵染和單獨侵染的樣本混合在一起，再進行擴增時，都能在一次PCR反應(yīng)中，同時能擴增出兩種病毒的相應(yīng)特異條帶，當(dāng)三種病毒單獨侵染的樣本混合在一起，再進行擴增時，都

3、能在一次PCR反應(yīng)中，同時擴增出三種病毒的相應(yīng)的特異條帶。對TMV病毒的靈敏度檢測可以達到1.25μg。 從廣東省主要煙區(qū)梅州地區(qū)五華縣和韶關(guān)地區(qū)南雄市，分別采集了煙草植株樣本，通過采用鑒別寄主反應(yīng)和RT-PCR方法，對其進行了鑒定。結(jié)果表明五華和南雄的煙草樣品中都存在TMV和CMV，未檢測到PVY。在檢測樣品中，表現(xiàn)為單獨TMV陽性的樣品占總樣品的33.33％，單獨CMV陽性的樣品占總樣品的22.22％，TMV、CMV都呈陽性