馬鈴薯的莖尖脫毒、復(fù)壯及RT-PCR檢測(cè).pdf

1、馬鈴薯病毒一直是困擾其種植的難題，最有效的方法就是進(jìn)行馬鈴薯脫毒。本文就馬鈴薯脫毒種薯采取了如下列技術(shù)措施：首先將帶毒薯在室內(nèi)催芽、消毒處理，然后在無(wú)菌條件下，切取莖尖分生組織，移植于試管中培養(yǎng)，大約4個(gè)月后，莖尖分生組織長(zhǎng)成試管苗；試管苗經(jīng)過(guò)病毒檢測(cè)，從大量植株中鑒定出不帶病毒的脫毒苗；再經(jīng)過(guò)切段快繁，及溫室和網(wǎng)棚內(nèi)繁殖，獲得脫毒微型小薯或原原種；再繁殖即可獲得原種，原種再繁殖成一級(jí)種薯、二級(jí)種薯和三級(jí)種薯，經(jīng)過(guò)上述途徑獲得的種薯一般

2、統(tǒng)稱為脫毒種薯。 由于馬鈴薯脫毒苗莖尖分生組織體積較小(約0.5mm)，所以在馬鈴薯莖尖脫毒的過(guò)程中經(jīng)常存在成苗率低、畸形化嚴(yán)重等問(wèn)題?；谶@些現(xiàn)象，本試驗(yàn)以新疆農(nóng)科院核生所提供的馬鈴薯品系A(chǔ)1、A2、D17、F3為研究對(duì)象，對(duì)形成莖尖脫毒苗所需的各種培養(yǎng)基類型進(jìn)行了詳細(xì)研究，結(jié)果表明：MS+0.05mg/L6-BA+0.5mg/LNAA+0.1mg/LGA3培養(yǎng)基對(duì)處理后的莖尖成活率和成苗率有較大的促進(jìn)作用。 為了檢測(cè)

3、所獲得的莖尖再生苗是否為脫毒苗，本文利用反轉(zhuǎn)錄PCR方法對(duì)再生苗進(jìn)行了檢測(cè)。首先用Trizol試劑盒提取植株總RNA，通過(guò)設(shè)計(jì)特異性引物進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄PCR，檢測(cè)在馬鈴薯再生苗中是否存在PVX、PVY、PVS病毒DNA，最終確定是否獲得脫毒苗，以建立檢測(cè)馬鈴薯病毒的快速簡(jiǎn)易的方法。 為了使馬鈴薯脫毒試管苗生長(zhǎng)健壯并在需要時(shí)能大量結(jié)薯，本文在培養(yǎng)基中添加了植物生長(zhǎng)延緩劑B9，研究了其對(duì)試管苗生長(zhǎng)狀況和扦插后的馬鈴薯微型薯結(jié)薯數(shù)的影響。