番茄褪綠病毒RT-PCR檢測方法的優(yōu)化應用及肥城桃2種病毒的鑒定.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、植物病毒病嚴重危害農業(yè)生產(chǎn),在蔬菜和果樹上尤為嚴重,可造成巨大的經(jīng)濟損失。病毒在侵染寄主植物后,造成植株代謝異常,果實減少或畸形,甚至絕收。本研究主要以蔬菜上的番茄褪綠病毒(Tomato chlorosis virus,ToCV)及果樹上的李屬壞死環(huán)斑病毒(Prunus necrotic ringspot virus,PNRSV)和李樹皮壞死莖紋孔伴隨病毒(Plum bark necrosis stem pitting-associat

2、ed virus,PBNSPaV)為研究對象,目的是優(yōu)化ToCV RT-PCR檢測方法,為日后檢測該病毒提供參考依據(jù);同時,摸清河南設施番茄主產(chǎn)區(qū)ToCV以及山東肥城桃主產(chǎn)區(qū)PNRSV和PBNSPaV的發(fā)生情況,了解系統(tǒng)發(fā)育關系。
  通過對ToCV RT-PCR檢測方法的優(yōu)化表明:ToCV特異性引物To-CP(F/R)的靈敏度和特異性最好,該引物能在退火溫度37~64℃、引物濃度4~10 pmol/μL的區(qū)間內檢測到ToCV的特

3、異性片段;引物To-HSP(F/R)可以一次性擴增HSP70基因的全長序列。優(yōu)化后的RT-PCR擴增效果相對穩(wěn)定;設計了同時擴增ToCV HSP70和CP基因的雙重PCR體系,能有效縮短實驗時間。
  對河南省ToCV發(fā)病情況進行調查與檢測,結果顯示:河南番茄主產(chǎn)區(qū)采集的90份疑似感病番茄樣品中,檢出陽性樣品39份,將得到的分離物序列(GenBank登錄號KP264983/KP2649865、KP264984/KP9264987、

4、KP264985/KP264988)用于序列一致性比較和系統(tǒng)發(fā)育分析。結果表明:本研究的分離物均與日本分離物的一致性最高,親緣關系最近。同時提取ToCV病毒粒子,經(jīng)負染色后,觀察到ToCV完整的形態(tài)結構。
  利用RT-PCR技術,對肥城桃主產(chǎn)區(qū)采集的158份桃樹葉片樣品,進行PNRSV和PBNSPaV的檢測與鑒定,結果顯示:PNRSV和PBNSPaV陽性樣品的檢出數(shù)量分別為9份和11份,將得到的分離物序列(GenBank登錄號K

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