三種甘薯病毒多重RT-PCR檢測方法的建立及甘薯脈花葉病毒(SPVMV)的分子鑒定.pdf

1、河南農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文三種甘薯病毒多重RT-PCR檢測方法的建立及甘薯脈花葉病毒（SPVMV）的分子鑒定姓名：張業(yè)輝申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：植物病理學(xué)指導(dǎo)教師：蔣士君;張振臣20090601D e v e l o p m e n t o f am u l t i p l e x R T - P C R d e t e c t i o nm e t h o d f o rt h r e es w ∞t p o t a t ov i r

2、u s e s a n d m o l e c u l a r i n d e n t i f i c a t i o no f s w e e t p o t a t o v e i nm o s a i c v i r u sS u p e r v i s e r ：a s s o c i a t e P r o f ．J I A N G S h i l J u na s s o c i a t eP r o f ．Z H A N

3、G Z h e n g - C h e nM a s t e r C a n d i d a t e ：Z H A N G Y eH u iA B S T R A C T V i r a ld i s e a s e so f t h e s w e e t p o t a t o a l ea i r y p r e v a l e n t a n d o f t e n c a u s es e r i o u sd 鋤a g e

4、t ot h e p l a n t s ，a n d s e v e r er e d u c t i o no f t h eq u a l i t ya n d y i e l do f s w e e tp o 協(xié)t o ，C u l t i v a t i o no f v i r u s ．f r e es w e e tp o t a t oi so n e o f t h em o s t e f f e c t i v

5、 em e t h o d t op r e v e n t s w e e tp o t a t ov i r u s d i s e a s e sa n d i m p r o v et h ep r o d u c t i o n o fs W e e tp o 齜·T h e r e f o r e ．t of i n d o u t t h ev a r i a t i o n o fs w e e t p o t

6、 a t o v i r u s e sa n de s t a b l i s h ah i g he f f i c i e n tm e t h o d t od e t e c ti tw i l lc o n t r i b u t et ot h e i n t e g r a t i v ec o n t r o lo f t h i sk i n do fv i m s d i s e a s e ．S w e e t

7、p o t a t o f e a t h e r ym o t t l ev i r u s ( S P F M V ) ，s w e e t p o t a t ol a t e n tv i r u s( S P L V ) ，s w e e f p D t a r ov i r u sG ( S P V G ) a n d s w e e t p o t a t ov e i nm o s s a i c V f f U S (

8、 S P V M V )a r et h em o s tp r e d o m i n a n tv i r a lp a t h o g e n s t h a th a db e e ni s o l a t e df r o ms w e e t p o t a t o ·T h e s e f o u rv i r u s e sa r e a l lm e m b e r s o f p o t y v i r u

9、 s ，a n d t h e y u s u a l l yi n f e c ts w e e t p o t a t ow i t h e a c ho t h e r ．E n z y m el i n k e di m m u n o s o r b e n ta s s a y ( E L I S A ) i sc o m m o n l y u s e d t od e t e c ta n t i b o d i e s

10、 O rs p e c i f i ca n t i g e n s ．B u ti t s l o w e rs e n s i t i v i t ya n dc r o s s ‘r e a c t i o n sb e 危w e e n a n t i b o d i e so f t h e s e v i r u sl i m i ti t ss p e c i f i c i t y ．I t i sd i f f i c

11、 u l tt oi d e n t i f yd i f f e r e n ts w e e t p o t a t ov i r u sb yE L I S A s p e c i f i c i a l l y ．W ea i m e d a t d e t e c t i n ga n dd i s t i n g u i s h i n gt h e s et h r e ep o t y v i r u s e s ，S

12、P F M V , S P L Va n dS P V G , s i m u l t a n e o u s l y ，b ym e a n so fm u l t i p l e xr e v e r s et r a n s c r i p t i o np o l y m e r a s ec h a i nr e a c t i o n ( m u l t i p l e xR T - P C R ) ·F o rS

13、 P V M V , 3 ’n u c l e o t i d e s s e q u e n c e W a s c l o n e d b y R T - P C R a n d t h e m o l e c u l a rc h a r a c t e r i s t i c s w e r e a n a l y s e d i nt h i sw o r k ，t o o ．T h r e ep a i r so fc o

14、m p a t i b l ep r i m e r ss p e c i f i c f o rS P F M V , S P L Va n dS P V G ‘w e r ed e s i g n e d i n t h ec o n s e r v e d r e g i o n s o f t h e c o a t p r o t e i n ( C P ) g e n ei n t h i s a s s a y ，a c

15、c o r d i n g t o t h ep u b l i s h e d n u c l e o t i d es e q u e n c e ．M u l t i p l e xR T - P C R w a s c a r r i e do u ta n d t h r e ed i s t i n c tf r a g m e n t sw e r eo b t a i n e d ，t P 。3 0 0 b p ，4 2

16、 0 b p a n d6 0 0 b p ，i n d i c a t i n gt h ep r e s e n c eo fS P F M V , S P L V a n d S P V G , r e s p e c t i v e l y ．S o m ee s s e n t i a lf a c t o r st h a tm i m a f f e c t t h ef i n a lr e s u l t sw e r

17、 ea n a l y s e di nt h ei n d i v i d u a lR T - P C R r e a c t i o n ，a n dt h e o p t i m i z e d d e t e c t i n g s y s t e m W a s c o n s t r u c t e d ．T o i n v e s t i g a t e t h e m o l e c u l a r c h a r a

18、 c t e r o fS P V M V i nH e n a n P r o v i n c e ，d e g e n e r a t ep r i m e r s w e r e d e s i g n e da c c o r d i n g t op u b l i s h e d n u c l e o t i d e s e q u e n c e s o f d i f f e r e n ti s o l -a t e