PCR-DGGE分析高溫制曲中細菌群落變化的研究.pdf

1、大曲是指含有大量能發(fā)酵的活微生物或酶類的糖化發(fā)酵劑。制曲技術是我國特有的一份民族遺產(chǎn)。曲是各種白酒香型風味的重要成因，不同曲中的微生物種類不同，相應白酒的香型也會不同。
　　 本論文以高溫大曲為研究對象，采用以PCR-DGGE為主的分子生物學方法，初步分析了制曲過程中各主要階段的細菌菌群的變化，為強化大曲發(fā)酵劑的開發(fā)提供了理論依據(jù)。
　　 本論文實驗內容主要分為四部分：第一，在提取大曲細菌總DNA過程中，比較了五種基于不

2、同裂解原理的DNA提取方法的效果，發(fā)現(xiàn)SDS-酶法結合使用的提取方法，高溫大曲中細菌總DNA的提取效率最高，且產(chǎn)量和質量最好，從而為后期實驗提供良好的DNA模板。第二，由于實驗中采用的引物存在特殊的“GC夾板”結構，本論文對目的基因的PCR擴增方法進行了優(yōu)化，比較了不同PCR方法的擴增結果，結果顯示，采用巢式PCR對16S rDNA V3區(qū)進行擴增，不但提高了對目的產(chǎn)物擴增的特異性，同時也使產(chǎn)量得以提高。第三，在預實驗中，首先通過垂直膠

3、電泳對DGGE變性濃度梯度范圍進行了確定，然后采用時間間隔法選擇了最佳電泳時間。結果顯示，變性梯度在30％-55％的范圍內樣品的分離效果最佳，同時確定電泳時間為10h。第四，通過PCR-DGGE技術對制曲過程中細菌的變化進行初步研究，結果表明：在制曲前期優(yōu)勢細菌群落變化較為突出，菌群結構更替頻繁，主要優(yōu)勢條帶的相似菌有：Bacillus sp。SSCS14-2，Bacillus galactosidilyticus，Virgibacil

4、lus carmonensis，Thermoactinomycessanguinis，uncultured bacterium，Virgibacillus sp.R-6767，其中后三者在制曲中期消失。從中期到后期優(yōu)勢條帶相似性較大，菌群群落結構比較穩(wěn)定，主要優(yōu)勢菌為：Bacilluslicheniformis，Virgibacillus carmonensis，Bacillus sp.TAT112，Bacillus galactosi