液態(tài)奶中阪崎腸桿菌污染狀況的研究.pdf

1、近年來，世界范圍內食品安全事件高發(fā)。越來越多的人開始關注食品安全問題。
　　 阪崎腸桿菌是1961年首次引起人們關注的。阪崎腸桿菌(Enterobacter sakazakii)是寄生于人和動物腸道的革蘭氏陰性無芽孢的兼性厭氧菌條件性腸道致病菌,具有產生α-葡萄糖苷酶和吐溫80脂酶、不發(fā)酵三梨醇以及無磷酸胺酶活性等生理生化特征,阪崎腸桿菌能引起嚴重的新生兒腦膜炎、菌血癥、小腸結腸炎，死亡率高達20％～50％以上。本研究利用顯色培

2、養(yǎng)基與PCR技術相結合的方法建立了一套從液態(tài)奶中快速檢出阪崎腸桿菌的方法，縮短了阪崎腸桿菌的檢測時間。
　　 本研究采用改進方法進行液態(tài)奶中阪崎腸桿菌的分離篩選結果采用傳統(tǒng)方法從167份的樣品中檢出阪崎腸桿菌3株,檢出率為 1.79 ％;采用改進方法從167份的樣品中檢出阪崎腸桿菌4株,檢出率為 2.39 ％。以阪崎腸桿菌的16S rRNA基因為靶基因，選擇特異性引物，進行PCR擴增，檢測液態(tài)奶中阪崎腸桿菌。其PCR適宜反應體系

3、為：6μL 10×PCR buffer,4 μL dNTPs混合物,2.5 Mg2+μL(25mM),2 μL 10 μmol正向引物,2 μL 10 μmol反向引物，0.25 μL（5 U/μL）Taq,23.25 μL水，總反應體系為50μL；其適宜的PCR擴增程序為：PCR反應采用冷啟動，95℃預變性5 min；變性95℃ 1 min～退火61℃ 0.5 min進行35個循環(huán)。PCR反應產物在2％的瓊脂糖凝膠中進行電泳，凝膠成像