乳粉中阪崎腸桿菌標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的制備.pdf

1、本試驗(yàn)研究了乳粉中阪崎腸桿菌標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的制備方法。本研究以一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)技術(shù)規(guī)范(JJG1006-94)為準(zhǔn)則，并且遵照中華共和國(guó)出入境檢驗(yàn)檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)中“奶粉中阪崎腸桿菌檢驗(yàn)方法--第1部分：分離與計(jì)數(shù)方法”的操作規(guī)范來(lái)進(jìn)行本試驗(yàn)。 由于適合的保護(hù)劑對(duì)阪崎腸桿菌標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的凍干保存很重要，所以本試驗(yàn)首先設(shè)計(jì)了一個(gè)保護(hù)劑試驗(yàn)米挑選最適合阪崎腸桿菌標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)凍干保存的保護(hù)劑。試驗(yàn)選擇了三種保護(hù)劑進(jìn)行比較：奶液(20g奶粉+80mL無(wú)菌水)

2、；營(yíng)養(yǎng)肉湯100mL+7.5g葡萄糖：0.1mol/L磷酸鹽緩沖液100ml+L-谷氨酸鈉3g+乳糖5g+聚乙烯吡咯烷酮6g。先將阪崎腸桿菌分別加到三種保護(hù)劑中，分裝到安瓿瓶中，預(yù)凍后進(jìn)行冷凍干燥，做生化試驗(yàn)，然后定期檢測(cè)各保護(hù)劑的含菌量。結(jié)果表明脫脂奶粉對(duì)阪崎腸桿菌的保護(hù)效果最好。此后，繼續(xù)定期檢測(cè)以脫脂奶粉作為保護(hù)劑的安瓿瓶中菌量，以檢測(cè)其穩(wěn)定性。 接到營(yíng)養(yǎng)肉湯中的阪崎腸桿菌在過(guò)夜培養(yǎng)后，濃度一般在108左右，將其稀釋到10

3、5，并從中取2ml菌液加到奶液(40g脫脂奶粉+160ml無(wú)菌水)中，倒入滅菌小瓷盤并在-70℃預(yù)凍18-24h，冷凍干燥48-60h，裝到均質(zhì)袋中并均質(zhì)器中拍打均勻；從中取10g奶粉+90ml無(wú)菌水，測(cè)其菌量；而后根據(jù)加菌奶粉的含菌量，用新鮮脫脂奶粉對(duì)其進(jìn)行稀釋，最終將其菌量稀釋到100g脫脂奶粉中僅含有數(shù)百個(gè)阪崎腸桿菌，并將這些奶粉分裝成最小單位(10g)，抽真空保存，并對(duì)這些制成的標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行穩(wěn)定性試驗(yàn)和均勻性試驗(yàn)。結(jié)果表明穩(wěn)定性和

4、均勻性都符合標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)，其中兩次均勻性試驗(yàn)的F值分別為1.759和0.548。 阪崎腸桿菌標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)制備完成以后，要進(jìn)行不確定度的評(píng)定。影響標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)制備的不確定度有很多，本試驗(yàn)對(duì)有重要影響的不確定度進(jìn)行評(píng)定，主要是菌落計(jì)數(shù)、乳粉中阪崎腸桿菌標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)定值方法、電子天平的不確定度。阪崎腸桿菌菌落計(jì)數(shù)的不確定度為0.06429；標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)定值方法的不確定度為11.508；電子天平的合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度U為1.42518，其擴(kuò)展不確定度為2