應(yīng)用實時熒光定量PCR技術(shù)檢測嬰幼兒奶粉中阪崎腸桿菌（克羅諾桿菌屬）的研究.pdf

1、阪崎腸桿菌(Enterbacter sakazakii)，是寄生在人和動物腸道內(nèi)的一種革蘭氏陰性無芽孢桿菌，周身鞭毛、能運動、兼性厭氧。該菌能引起嚴(yán)重的腦膜炎、壞死性小腸結(jié)腸炎和菌血癥等病癥，可感染各年齡段免疫力低下的人群，尤其是新生兒、早產(chǎn)兒及出生時身體條件較差的嬰兒，感染后嬰兒死亡率高達50％以上，是一種重要的食源性條件致病菌。
　　近年來，國內(nèi)外越來越多的研究表明:嬰幼兒配方奶粉是引起嬰幼兒感染的主要傳染源和傳播媒介。目前，

2、GB法檢測阪崎腸桿菌主要是基于傳統(tǒng)的微生物培養(yǎng)，然后綜合菌落形態(tài)、生化特征等進行鑒定。此法操作繁瑣、耗時耗力、且不易分辨結(jié)果，存在一定假陽性。所以近年來，采用分子生物學(xué)的方法檢測食源性病菌得到越來越廣泛的應(yīng)用。
　　本論文基于中華人民共和國出入境檢驗檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)(SN/T1632.3-2013)中阪崎腸桿菌（克羅諾桿菌屬）實時熒光定量PCR檢驗方法，首先將PCR反應(yīng)各組分預(yù)混成Mix Buffer，大大簡化了操作步驟，同時對各組分

3、濃度及反應(yīng)體系進行了優(yōu)化，實現(xiàn)阪崎腸桿菌Real-time PCR的快速檢測。其次，通過對比酚氯仿和加熱裂解兩種DNA提取方法，對加熱裂解法進行了優(yōu)化，并用貝因美奶粉樣本和人工污染樣本進行了驗證。人工污染奶粉的阪崎腸桿菌的檢出限可達4.7×103CFU/ml。
　　本文中所有實時熒光定量PCR實驗都是在博日公司自主研發(fā)的實時熒光定量PCR儀器平臺和博日專利產(chǎn)品“標(biāo)準(zhǔn)PCR實驗室”內(nèi)完成，從而初步建立了“試劑、儀器、軟件、PCR污染