共軛亞麻酸的制備、表征及與蛋白質(zhì)的相互作用.pdf

1、多不飽和脂肪酸(PUFA)是一類含有兩個或兩個以上雙鍵且碳原子數(shù)為16～22的直鏈脂肪酸。共軛亞麻酸(Conjugated Linolenic acid,CLnA)屬于含有三個雙鍵的共軛多烯不飽和脂肪酸,具有抗癌、降血壓、降血脂等非常重要的生物活性。因而無論是作為藥品還是保健食品,開展CLnA的研究對開發(fā)新的醫(yī)藥和人類的健康和生活都具有重要的意義。 本論文首先對多不飽和脂肪酸做了概述,講述了共軛亞油酸、共軛亞麻酸、花生四烯酸、D

2、HA、EPA等的存在以及生理活性。在制備方法中,我們概述了CLnA的幾種主要的化學(xué)合成方法以及在生物體內(nèi)合成共軛多烯不飽和脂肪酸的三種主要的酶促反應(yīng)。接著概述了包括GC、HPLC、NMR和紫外光譜等在內(nèi)的幾種主要表征手段,并且介紹了目前對CLnA的研究現(xiàn)狀以及存在的問題,敘述了我們的研究目的和內(nèi)容。 在第二章中,我們研究了CLnA的制備方法。一種是化學(xué)合成法。我們以亞麻籽油為原料,經(jīng)堿異構(gòu)化之后合成出了CLnA。GC和紫外光譜測

3、試表明其產(chǎn)物為CLnA和二共軛亞麻酸,當(dāng)催化劑的濃度達(dá)到40％,反應(yīng)時間延長到10小時后,CLnA的產(chǎn)率達(dá)到了27.2％。另外一種方法是從天然產(chǎn)物中提取。我們采用低溫結(jié)晶法來提純桐油和石榴籽油中的CLnA,并對提純方法進(jìn)行了優(yōu)化。桐油和石榴籽油的提取率分別達(dá)到了50.9％和47.3％。較適合于工業(yè)化生產(chǎn)。在做CLnA的GC、HPLC表征的時候需要將其進(jìn)行甲基化。我們在實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),不當(dāng)?shù)募谆瘲l件將導(dǎo)致其發(fā)生內(nèi)異構(gòu)化,因此在第三章中,我們

4、通過分析甲基化后CLnAMe各個異構(gòu)體的含量,研究了不同的甲基化試劑和甲基化溫度對CLnA的內(nèi)異構(gòu)化影響情況。并且使用Ag+-HPLC對各個異構(gòu)體的含量進(jìn)行了分析。得出了最佳的甲基化條件。在論文的第四章中,我們研究了CLnAMe與生物大分子牛血清白蛋白的相互作用。我們使用BSA內(nèi)源熒光的猝滅光譜、同步熒光光譜、圓二色光譜(CD)為表征手段,通過對BSA的熒光滅光猝譜和同步光譜進(jìn)行回歸分析,計(jì)算出了一系列相互作用參數(shù),包括結(jié)合位點(diǎn)、結(jié)合常

5、數(shù)、結(jié)合位點(diǎn)數(shù)、相互結(jié)合熱力學(xué)參數(shù)、相互作用力類型等。通過CD光譜這一表征手段,研究了CLnAMe對BSA二級結(jié)構(gòu)的影響。從而研究了三種CLnAMe異構(gòu)體,即β-桐酸甲酯、石榴酸甲酯、α-桐酸甲酯與BSA之間的相互作用。為理解其生物活性機(jī)理提供了依據(jù)。 CLnA含有三個共軛雙鍵,它在空氣中是非常不穩(wěn)定的。這對CLnA性質(zhì)的研究和大規(guī)模的工業(yè)生產(chǎn)以及將來的應(yīng)用都造成了很大的不便。因此在第五章中,我們選用β-環(huán)瑚精做為載體,研究了C