從葵花籽中提取綠原酸與制備功能性多肽的研究.pdf

1、本文以葵花籽為原料，首先提取綠原酸;然后采用堿溶酸沉法從中提取分離蛋白，再利用復(fù)合酶解法與超聲波裂解技術(shù)制備小分子葵花籽多肽，經(jīng)膜技術(shù)分離純化后，對該多肽的抑制亞硝化反應(yīng)、抗紅細(xì)胞溶血及抗酒精性肝損傷等作用進(jìn)行了系統(tǒng)研究。結(jié)果表明:
　　1、用醇溶法提取脫脂葵花籽粉中的綠原酸，最佳工藝條件為溫度40℃、乙醇濃度50％、pH6.0、料液比1∶20浸提時(shí)間2h，其得率為2.46％。提取液用正丁醇-冰醋酸-水(4∶2∶5)作為展開劑進(jìn)行

2、薄層定性鑒定，發(fā)現(xiàn)樣品與綠原酸標(biāo)品在相應(yīng)位置顯現(xiàn)相同的斑點(diǎn)，說明提取物中含有綠原酸。
　　2、試驗(yàn)采用堿溶酸沉法提取葵花籽分離蛋白，然后用堿性蛋白酶和復(fù)合酸性蛋白酶兩階段酶解制備葵花籽多肽。在制備過程中結(jié)合超聲波輔助酶解，可以使該多肽的水解效率明顯提高。Tricine-SDS-PAGE電泳和SephadexG-25凝膠層析分析表明，本工藝所得葵花籽多肽的主要成分是小于3.4kDa的多肽，其中3000Da以下的占78.41％。

3、>　　3、前工序得到的葵花籽多肽溶液在操作壓力0.3MPa，濃度2％，pH值6.0的條件下依次經(jīng)過截留量為4000Da和2000Da的超濾膜進(jìn)行超濾分離，得到4000Da以上(SSP1)、4000～2000Da(SSP2)和2000Da以下(SSP3)三種不同分子量的葵花籽多肽組分。超濾后的樣品用納濾和反滲透組件進(jìn)行脫鹽處理，結(jié)果表明，納濾和反滲透脫鹽率均較高，但是反滲透處理對總氮的損失較大，而納濾總氮損失率僅為12.17％，綜合考慮，

4、只選用納濾裝置進(jìn)行脫鹽處理。
　　4、本研究對SSP1、SSP2和SSP3三種不同分子量的葵花籽多肽進(jìn)行了體外清除亞硝酸鹽和阻斷N-二乙基亞硝胺合成的作用，以及抑制紅細(xì)胞自氧化溶血和H2O2誘導(dǎo)紅細(xì)胞氧化溶血等抗氧化活性的比較研究。結(jié)果表明，分子量在4000～2000Da的葵花籽多肽(即SSP2)在清除NaNO2、抑制亞硝胺合成以及抑制紅細(xì)胞氧化溶血等方面的效果最強(qiáng)，是制作食源性防癌和抗氧化劑的理想原料。
　　5、用SSP2