小黑豆乳清蛋白和多肽的提取及其功能性研究.pdf

1、本文以小黑豆為原料得到的小黑豆乳清水。經(jīng)膜技術(shù)分離純化后得到小黑豆乳清蛋白。利用單酶水解和雙酶復(fù)合酶解法制備小分子乳清多肽，通過體外抗S180和H22腫瘤細胞實驗篩選出抗腫瘤效果好的多肽。對該多肽和蛋白的體內(nèi)免疫功能、抗S180腫瘤、抗皮膚乳頭瘤和抗化學(xué)性肝癌進行了系統(tǒng)研究。結(jié)果表明:
　　 1、試驗用絮凝離心法對小黑豆乳清水進行預(yù)處理，最佳工藝條件為:pH8.0、CaCl2加入量15ml·L-1、溫度40℃。再經(jīng)微濾、超濾得到

2、小黑豆乳清蛋白。經(jīng)SephadexG-50凝膠分析表明，本工藝制得的小黑豆乳清蛋白分子量范圍在6.0KD-10.0KD的占到50.3％，高于10.0KD的大分子約占45％。
　　 2.小黑豆與黃大豆乳清水和蛋白組成的比較分析表明，小黑豆乳清水中的乳清蛋白、灰分、總糖含量均高于大豆乳清水;通過電泳分析表明，小黑豆乳清蛋白和大豆乳清蛋白的分子量主要分布在30.0KD以下，小黑豆乳清蛋白中的BBI含量高于大豆乳清蛋白。
　　

3、3、以小黑豆乳清蛋白為底物，用單一蛋白酶和雙酶復(fù)合酶解制備小黑豆乳清多肽。細菌酸性蛋白酶單酶水解制備的多肽得率最高，可達97％。雙酶復(fù)合水解多肽得率最高的為先胃蛋白酶處理后細菌酸性蛋白酶處理，其多肽得率為63.36％。經(jīng)SephadexG-25凝膠層析分析表明，本工藝所得乳清多肽的主要成分是小于1KD的多肽，占80％以上。
　　 4、本研究對多種多肽進行體外抗腫瘤實驗，得到以下結(jié)論:木瓜蛋白酶水解制備的多肽對S180、H22腫瘤

4、細胞的抑制效果最顯著。針對這一最佳抗腫瘤效果，設(shè)計了木瓜蛋白酶水解制備多肽的正交試驗，得到最佳多肽制備工藝為:加酶量5000U/g蛋白，pH6.0，處理溫度為65℃。
　　 5、本研究對小黑豆乳清蛋白及多肽進行免疫功能試驗。試驗發(fā)現(xiàn)，小黑豆乳清蛋白及多肽對小鼠免疫器官無明顯抑制作用。在相同劑量時，75℃處理組抑制荷瘤小鼠各項免疫功能下降的作用明顯好于65℃處理，且呈一定的量效關(guān)系;多肽組提高免疫效果優(yōu)于蛋白組，但多肽劑量與抗腫瘤