趨化因子CXCL10在骨癌痛大鼠脊髓背角CD8+T細胞增殖中的作用.pdf

1、目的:
　　探討趨化因子CXCL10上調(diào)在骨癌痛大鼠脊髓CD8+T細胞增殖中的作用。
　　方法:
　　1、24只SPF級雌性SD大鼠，體重180～200g，采用隨機數(shù)字表法，將大鼠分為假手術(shù)組（Sham組，n=9）和骨癌痛（CIBP組，n=15）。Sham組于大鼠右側(cè)脛骨平臺注射10μl滅活Walker256細胞，CIBP組于大鼠右側(cè)脛骨平臺注射10μl Walker256細胞。于造模前1d，后3rd、7th、14th

2、、21std測量機械縮爪閾值（mechanical withdrawal thresholds，MWT）后于7th、14th、21std分別處死Sham組3只、CIBP組5只。取脊髓腰膨大部分，采用免疫熒光法，觀測CD8+T細胞數(shù)量，并使用14thd大鼠脊髓切片進行CD8與CXCR3免疫熒光雙標。
　　2、24只SPF級雌性SD大鼠，體重180～200g，采用隨機數(shù)字表法，分為nave組、溶劑對照組和rrCXCL10組，每組8只。

3、置管成功后第3d起，溶劑對照組及rrCXCL10組分別于鞘內(nèi)注射10μl無菌生理鹽水及rrCXCL10，并給予10μl無菌生理鹽水沖管，1次/d。自給藥起，每日于給藥前測定MWT，觀察MWT變化趨勢，并于MWT趨于穩(wěn)定后（第5d），處死取脊髓腰膨大部分，采用免疫熒光，Western blot法測定CD8+T細胞表達量。
　　3、24只SPF級雌性SD大鼠，體重180～200g，采用隨機數(shù)字表法，分為CIBP組、CIBP+AMG48

4、7組和CIBP+20％HPβCD組，每組各8只。其中CIBP+AMG487組及CIBP+20％HPβCD組在造模前3d進行鞘內(nèi)置管，從造模當(dāng)天開始，分別鞘內(nèi)注射10μl CXCR3抑制劑AMG487及AMG487溶劑20％HPβCD，并給予10μl無菌生理鹽水沖管。1次/d，共14d。連續(xù)給藥14d后，處死取脊髓腰膨大部分，采用免疫熒光，Western blot法測定CD8+T細胞表達量。
　　結(jié)果:
　　1、與Sham組相

5、比，CIBP組MWT在7th、14th、21std明顯下降；免疫熒光結(jié)果顯示脊髓背角CD8+T細胞數(shù)明顯增多(P<0.05)，并在14thd達到頂峰，21std逐漸降低。免疫熒光雙標結(jié)果顯示CD8與CXCR3共表達于同一細胞上。
　　2、與溶劑對照組相比，rrCXCL10組MWT在連續(xù)給藥2d后，開始出現(xiàn)明顯下降(P<0.05)，并在連續(xù)給藥5d時趨于穩(wěn)定。此時，脊髓背角CD8+T細胞數(shù)目明顯增加。與nave組相比，溶劑對照組在測

6、痛結(jié)果以及CD8+T細胞數(shù)目變化差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
　　3、與CIBP+20％HPβCD組相比，CIBP+AMG487組在連續(xù)給藥14d后，免疫熒光與Western blot結(jié)果顯示脊髓背角CD8+T細胞數(shù)目明顯降低(P<0.05)。與CIBP組相比，CIBP+20％HPβCD脊髓背角CD8+T細胞數(shù)目變化無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
　　結(jié)論:
　　1、骨癌痛模型中，脊髓背角CD8+T細胞數(shù)目增多，

7、并于14d達到頂峰；
　　2、骨癌痛模型中的CD8+T細胞可以表達CXCL10作用受體CXCR3；
　　3、通過在nave大鼠上使用重組大鼠CXCL10蛋白，使大鼠機械痛閾下調(diào)穩(wěn)定后，脊髓背角CD8+T細胞數(shù)目增多；
　　4、通過抑制骨癌痛大鼠CXCR3受體，使大鼠脊髓背角CD8+T細胞數(shù)目減少；
　　綜上：骨癌痛大鼠脊髓背角表達上調(diào)的CXCL10作用于CD8+T細胞上表達的CXCR3受體，使脊髓背角中CD8+T