中腦導(dǎo)水管周圍灰質(zhì)小膠質(zhì)細(xì)胞活化在大鼠脛骨癌痛中的作用.pdf

1、本研究分為二部分：
　　第一部分：中腦導(dǎo)水管周圍灰質(zhì)小膠質(zhì)細(xì)胞在大鼠脛骨癌痛中的活化
　　目的：觀察大鼠脛骨癌痛中腦導(dǎo)水管周圍灰質(zhì)腹外側(cè)核（Ventrolateralmidbrain periaqueductal gray, VL-PAG）小膠質(zhì)細(xì)胞活化情況，探討VL-PAG小膠質(zhì)細(xì)胞激活是否參與骨癌痛的發(fā)生機(jī)制。
　　方法：雌性SD大鼠40只，體重200～250 g，9周齡，采用隨機(jī)數(shù)字法，將其分為5組:正常組（N組

2、，n=8）、假手術(shù)組（S組，n=8）、骨癌痛8天組(A8組，n=8)、骨癌痛12天組（A12組，n=8）和骨癌痛16天組(A16組，n=8)。A8組、A12組和A16組分別在大鼠左脛骨上端注射Walker256乳腺癌細(xì)胞10μl;S組大鼠左脛骨上端注射Hank's液10μl。N組不做任何操作。通過von Frey檢測大鼠建模前后同側(cè)患肢的機(jī)械痛閾(mechanical withdrawl threshold，MWT)變化;每組取8只大鼠

3、，待測定大鼠機(jī)械痛閾值后，行4％多聚甲醛灌注后取腦組織，進(jìn)行免疫組織化學(xué)方法觀察Ibal的活化變化。
　　結(jié)果：通過左脛骨骨髓腔內(nèi)注射癌細(xì)胞成功建立大鼠骨癌痛模型，與S組、N組比較，骨癌痛第8天時(shí)同側(cè)患肢MWT值明顯降低（P＜0.01）。隨著骨癌的進(jìn)展，從第8天至16天MWT值逐步下降（P＜0.01）。與S組、N組比較，A8組、A12組和A16組(PAG)小膠質(zhì)細(xì)胞計(jì)數(shù)升高，胞體肥大，突起減少(P＜0.05)，免疫染色I(xiàn)OD值（積

4、分吸光度值）升高（P＜0.01）;N組和S組中(PAG)小膠質(zhì)細(xì)胞分布彌散; S組和N組的Iba1細(xì)胞計(jì)數(shù)與IOD值分別比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　結(jié)論：脛骨癌痛可使SD大鼠在第8-16天的機(jī)械痛閾值逐漸下降，VL-PAG小膠質(zhì)細(xì)胞發(fā)生明顯的活化，推測VL-PAG小膠質(zhì)細(xì)胞活化可能參與大鼠脛骨癌痛的發(fā)生與維持。
　　第二部分：中腦導(dǎo)水管周圍灰質(zhì)微量注射米諾環(huán)素對(duì)骨癌痛大鼠的抗痛敏作用及小膠質(zhì)細(xì)胞活化的影響

5、
　　目的：觀察VL-PAG內(nèi)微量注射小膠質(zhì)細(xì)胞抑制劑米諾環(huán)素對(duì)脛骨癌痛大鼠疼痛行為學(xué)以及小膠質(zhì)細(xì)胞活化的影響，研究VL-PAG小膠質(zhì)細(xì)胞在骨癌痛中的作用。
　　方法：雌性SD大鼠36只，體重200～250 g，9周齡，采用隨機(jī)數(shù)字法，將其分為3組:假手術(shù)給生理鹽水組(SN組，n=12)、骨癌生理鹽水對(duì)照組(AN組，n=12)和骨癌米諾環(huán)素組(AM組，n=12)。AN組和AM組分別在大鼠左脛骨上端注射Walker256乳腺癌

6、細(xì)胞10μl; SN組大鼠左脛骨上端注射Hank's液10μl。造模后第12天時(shí)，SN組、AN組和AM組分別于VL-PAG注射生理鹽水(0.5μl)或米諾環(huán)素(400pmol/0.5μl)。每組取8只大鼠，分別于術(shù)前1d(T0)、第12天給藥前30 min(T1)、第12天給藥后15 min(T2)、第12天給藥后30 min(T3)、第12天給藥后45min(T4)、第12天給藥后60 min(T5)、時(shí)測定機(jī)械痛閾。另每組隨機(jī)取4只

7、，于T3時(shí)行深麻醉后4％多聚甲醛灌注取腦組織，冰凍切片行免疫組化觀察Iba1的表達(dá)水平。
　　結(jié)果：各組大鼠基礎(chǔ)痛閾值(T0)比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);與SN組比較，AN組和AM組大鼠在T1時(shí)左后足機(jī)械痛閾值下降(P＜0.01);與AM組T1時(shí)刻比較，在VL-PAG微量注射米諾環(huán)素后15～75min的時(shí)間點(diǎn)(T2-4)大鼠機(jī)械痛閾值增高，在T3時(shí)痛閾達(dá)到最高值，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。而與AN組T1時(shí)刻比較

8、，在VL-PAG微量注射生理鹽水后15min(T2)大鼠機(jī)械痛閾值增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，T3-5機(jī)械痛閾回到了T1水平，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。免疫組化顯示:與SN組比較，AN組Iba1的細(xì)胞數(shù)量明顯增多，胞體增大，呈變形蟲樣改變，免疫染色I(xiàn)OD值上升(P＜0.01)，與AN組比較，AM組Iba1的細(xì)胞數(shù)量降低，胞體變小，免疫染色I(xiàn)OD值降低(P＜0.05)。
　　結(jié)論：微量注射小膠質(zhì)細(xì)胞抑制劑米諾環(huán)素可部分減輕骨癌引