RhoA在大鼠脊髓損傷后膠質(zhì)細(xì)胞活化增殖中的作用.pdf

1、目的：觀察脊髓損傷后損傷灶附近神經(jīng)元的病理變化及膠質(zhì)細(xì)胞增殖活化情況；觀察RhoA在大鼠脊髓損傷后的表達(dá)及RhoA在神經(jīng)元，小膠質(zhì)細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞、NG2膠質(zhì)細(xì)胞中的表達(dá)以及在神經(jīng)元的死亡和膠質(zhì)細(xì)胞增生活化中可能的作用。
　　方法：選擇SPF級雄性Wistar大鼠60只，體重約250-300g，所有大鼠在手術(shù)前后均自由進(jìn)食水。大鼠隨機(jī)分為兩組（n=30）：手術(shù)組和假手術(shù)組：手術(shù)組用改良Allen's打擊法制作脊髓損傷模型（選擇大

2、鼠T10部位脊髓）；假手術(shù)組只手術(shù)切除椎板，不損傷脊髓。術(shù)后給予腹腔注射青霉素預(yù)防感染。分別于術(shù)后3d，7d，30d每組隨機(jī)取5只大鼠，取損傷灶附近脊髓組織（T9-11部位），用組織病理檢查觀察損傷部位脊髓組織病理學(xué)改變；用蘇木精染色觀察脊髓損傷部位神經(jīng)元死亡及膠質(zhì)細(xì)胞增生情況；WesternBlot檢測脊髓損傷后RhoA的表達(dá)，免疫組化雙標(biāo)方法觀察RhoA在神經(jīng)元和膠質(zhì)細(xì)胞中的表達(dá)和分布。
　　結(jié)果：使用膠質(zhì)纖維酸性蛋白熒光染色

3、顯示正常脊髓組織結(jié)構(gòu)連續(xù)，脊髓損傷后損傷部位組織出現(xiàn)部分壞死，且以損傷灶為中心形成空洞。蘇木精染色顯示大鼠脊髓損傷后，損傷灶周圍神經(jīng)元出現(xiàn)進(jìn)行性壞死。另外使用GFAP、CD11b和NG2作為星形膠質(zhì)細(xì)胞、小膠質(zhì)細(xì)胞和NG2膠質(zhì)細(xì)胞的特異性標(biāo)記物，免疫熒光單標(biāo)顯示在正常脊髓組織中這三種膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)較少，脊髓損傷后3d到30d，損傷灶附近三種膠質(zhì)細(xì)胞的特異性標(biāo)記物表達(dá)上調(diào)，脊髓損傷后3d可見，7d達(dá)高峰，持續(xù)至第30d（P<0.05）。免疫

4、熒光雙標(biāo)（RhoA/Neun、RhoA/GFAP、RhoA/CD11b和RhoA/NG2）在激光共聚焦熒光顯微鏡下顯示正常脊髓組織神經(jīng)元中RhoA表達(dá)量少，脊髓損傷后損傷灶附近殘存的神經(jīng)元以及增生的星形膠質(zhì)細(xì)胞、小膠質(zhì)細(xì)胞RhoA表達(dá)均明顯升高，而NG2膠質(zhì)細(xì)胞未見RhoA表達(dá)。Westernblot提示對照組脊髓中RhoA僅有少量表達(dá)，脊髓損傷后3d可見脊髓中RhoA表達(dá)升高，7d達(dá)高峰,持續(xù)高表達(dá)至實(shí)驗(yàn)結(jié)束（P<0.05）。