nav1.8在骨癌痛大鼠痛覺過敏維持機(jī)制中的作用研究

1、第二軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文Nav1.8在骨癌痛大鼠痛覺過敏維持機(jī)制中的作用研究姓名：繆雪蓉申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：麻醉學(xué)指導(dǎo)教師：俞衛(wèi)鋒20090501第．二軍醫(yī)人學(xué)博十論文骨癌痛維持機(jī)制。研究內(nèi)容主要包括以下四個(gè)方面：( 1 ) 大鼠脛骨內(nèi)注射w a l k e r 2 5 6乳腺癌細(xì)胞建立骨癌痛模型及進(jìn)行疼痛行為學(xué)評估；( 2 ) 通過R E A L ．T I M E P C R 、免疫印跡和免疫熒光染色觀察D R G 神經(jīng)元中N a

2、 v l ．8 鈉通道m(xù) R N A 和蛋白表達(dá)情況； ( 3 ) 利用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)記錄D R G 神經(jīng)元T 1 ’) ( ．R 鈉電流，觀察T T X ．R鈉通道的功能變化；( 4 ) 鞘內(nèi)給予N a v l ．8 反義寡核苷酸對骨癌痛大鼠疼痛行為的影響。通過以上實(shí)驗(yàn)探討鈉通道N a v l ．8 是否和如何參與了骨癌痛維持過程中的痛覺過敏。結(jié)果如下：1 ．骨癌痛模型建立雌性W i s t a r 大鼠脛骨內(nèi)接種2x 1 0 5

3、個(gè)W a l k e r2 5 6 細(xì)胞，術(shù)后第1 0 天起觀察到自發(fā)性運(yùn)動(dòng)痛評分進(jìn)展性增高；誘發(fā)痛行為主要表現(xiàn)為機(jī)械性痛覺過敏而無明顯的熱痛覺過敏，與文獻(xiàn)報(bào)道一致。在骨癌晚期( 術(shù)后第1 7 天起) 可以觀察到鏡像痛行為。影像學(xué)結(jié)果提示，術(shù)后第2 1 天骨質(zhì)破壞明顯，部分大鼠出現(xiàn)病理性骨折。病理檢查可見晚期脛骨外觀呈膨脹性增生，脛骨內(nèi)有腫瘤生長，骨質(zhì)破壞和增生同時(shí)存在。脊髓切片G F A P 染色見患側(cè)全層星形膠質(zhì)細(xì)胞明顯肥大增生。以

4、上結(jié)果表明大鼠骨癌痛模型成功建立，模型主要行為學(xué)特征為自發(fā)性運(yùn)動(dòng)疼痛機(jī)械性痛覺過敏和機(jī)械性痛覺過敏。2 ．N a y l ．8 鈉通道在骨癌痛大鼠D R G 神經(jīng)元中的表達(dá)下調(diào)一骨癌痛大鼠在術(shù)后1 6 —1 9 天疼痛行為明確且穩(wěn)定。在此期間，骨癌痛大鼠雙側(cè)腰段D R G 神經(jīng)元中N a v l ．8 m R N A 水平顯著降低。W e s t e r n b l o t 結(jié)果顯示，骨癌痛大鼠雙側(cè)D R G 中N a v l ．8 蛋

5、白水平明顯降低，術(shù)側(cè)蛋白表達(dá)比對側(cè)更低。免疫熒光染色發(fā)現(xiàn)，癌痛大鼠雙側(cè)D R G 神經(jīng)元N a y I ．8 免疫熒光強(qiáng)度均有所降低，N a v l ．8 在小細(xì)胞上的表達(dá)顯著減少。以上結(jié)果提示在骨癌痛大鼠疼痛維持期，N a v l ．8 在D R G 神經(jīng)元表達(dá)的顯著降低可能與癌痛相關(guān)。骨癌痛大鼠手術(shù)對側(cè)D R G 神經(jīng)元N a v l ．8 的變化提示骨癌痛發(fā)展維持過程中腫瘤源性的因素對鈉通道表達(dá)的調(diào)節(jié)作用。3 ．骨癌痛大鼠D R

6、G 神經(jīng)元T T X —R 鈉電流密度下降骨癌痛組D R G 神經(jīng)元的形態(tài)及被動(dòng)膜電生理特性包括膜電容、靜息電位等與對照組相比均無顯著差異。癌痛組術(shù)側(cè)D R G 神經(jīng)元總鈉電流和T T X ．R 鈉電流密度大量降低，提示N a v l ．8 的表達(dá)降低引起了T T X ．R 鈉電流的減少。而骨癌痛對側(cè)鈉電流與假手術(shù)組相比無明顯變化，提示腫瘤引起鈉通道亞型的可塑性變化和功能代償。4 ．鞘內(nèi)給予N a v l ．8 反義寡核苷酸可有效減輕骨